Эритроциты

Работа 1.	Приготовление препарата крови.
Цель опыта:	§ ознакомиться с методикой приготовления нефиксированного и фиксированного мазка крови; § изучить клетки крови.

Ход опыта:

Приготовление нативного (нефиксированного) мазка крови. Каплю стабилизированной крови поместить на предметное стекло и накрыть покровным. Приготовленный препарат рассматривают под микроскопом на большом увеличении.

Среди расположенных в виде «монетных столбиков» эритроцитов видны единичные лейкоциты.

@Зарисовать наблюдаемую под микроскопом картину.

РИСУНОК (препарат крови)

Приготовление фиксированного мазка крови (для подсчета лейкограммы). Каплю крови наносят на сухое предметное стекло (рис. 1, а). Шлифовальное стекло устанавливают под углом 45° к предметному. Кровь при соприкосновении со шлифовальным стеклом растекается по его краю (рис. 1, б). После этого быстрым движением шлифовальное стекло продвигают вперед, скользя по поверхности предметного стекла. При этом кровь тонким равномерным слоем размазывается по предметному стеклу (рис. 1, в).

Хорошо приготовленный мазок крови выглядит на просвет желтоватым, равномерным и прозрачным. В этом случае форменные элементы крови располагаются в нем в один слой.

Мазок высушивают на воздухе при комнатной температуре. В случае необходимости его можно высушить около пламени горелки, держа стекло в горизонтальном положении за края большим и указательным пальцами мазком вверх. Внимание! При высокой температуре может произойти нарушение структуры клеток.

После полного высыхания мазки крови фиксируют. Обработка мазков фиксирующими жидкостями придает форменным элементам стойкость по отношению к содержащейся в красках воде, которая без фиксации мазков гемолизирует эритроциты и изменяет строение лейкоцитов. Кроме того, фиксация, вызывая коагуляцию белка, прикрепляет препарат к стеклу.

После фиксации предметное стекло окрашивают для более точного отличия клеток друг от друга.

Рис. 1. Схема приготовления мазка крови.

а, б, в — этапы приготовления мазка

ВЫВОД (сделайте вывод о составе крови)

@ _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа 2.	Гемолиз эритроцитов и его виды.
Цель опыта:	изучить виды гемолиза эритроцитов.

Ход работы. Подписать три пробирки и поставить их в штатив. В первую налить 5 мл физиологического раствора (№ 1), во вторую – 5 мл физиологического раствора и 5 капель нашатырного спирта (№ 2), в третью – 5 мл дистиллированной воды (№ 3).

Затем в каждую пробирку добавить по 3 капли стабилизированной крови и перемешать содержимое. Результат оценить через 30 мин. Данные занести в таблицу.

№ пробирки	Содержимое пробирки	Наличие гемолиза («+» или «-»)
	Физиологический раствор (5 мл)
	Физиологический раствор (5 мл) + 5 капель NH₄OH
	Дистиллированная вода (5 мл)

ВЫВОД (сделайте вывод о механизмах наблюдаемого гемолиза в каждом конкретном случае)

Работа 3.	Определение осмотической резистентности эритроцитов.
Цель опыта:	изучить резистентность эритроцитов.

Ход работы. Приготовить растворы поваренной соли NaCl различной концентрации (см. ниже таблицу) и внести их в пронумерованные пробирки. После этого добавить в каждую пробирку по 3 капли дефибринированной крови. Смесь взболтать и оставить стоять в течение 5-10 мин, после чего отцентрифугировать (или дать постоять в течение часа).

Если осадок эритроцитов достаточно большой, а слой жидкости слегка окрашен, это свидетельствует о наличии частичного гемолиза, что позволяет определить минимальную резистентность эритроцитов. Если же осадка нет, а жидкость прозрачна и интенсивно окрашена («лаковая кровь»), то наступил полный гемолиз, что указывает на предел максимальной резистентности эритроцитов.

Результаты опыта занести в таблицу и сравнить полученные результаты с нормой.

Показатели	Номер пробирки

1% NaCl, мл
Дистиллированная вода, мл
Концентрация раствора, %	0,9	0,7	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1
Степень гемолиза

Степень гемолиза: «-» - отсутствует; «+» - частичный, выражен слабо; «++» - частичный, выражен хорошо; «+++» - полный.

ВЫВОД (сделайте вывод о степени осмотической резистентности эритроцитов исследованной крови)

@ ___________________________________________________________________________________________________________________________

Работа 4.	Определение скорости оседания эритроцитов.
Цель опыта:	ознакомиться с техникой СОЭ.

Ход работы: в капиллярную пипетку Панченкова набрать цитратную кровь до отметки «0» и, заметив время, поставить в штатив. Результат смотреть через 1 час, отсчитывая по делениям пипетки величину оставшегося столбика плазмы.

При вертикальном положении пипетки Панченкова у здоровых животных СОЭ равна (мм/ч): КРС 0,5-1,5; МРС 0,5-1,0; лошади 40-70; свиньи 2-9; собаки 2-6; куры 2-3.

ВЫВОД (сделайте вывод о скорости оседания эритроцитов исследованной крови)

@ ___________________________________________________________________________________________________________________________

Работа 5.	Определение количества гемоглобина в крови методом Сали.
Цель опыта:	ознакомиться с принципом работы гемометра Сали.

Гемометр Сали представляет собой штатив со вставленными в него тремя пробирками одинакового диаметра. Две крайние запаяны сверху и содержат раствор солянокислого гематина, средняя градуирована и открыта. К аппарату прилагается микропипетка для взятия крови на 20 мм³, глазная пипетка и стеклянная палочка.

@Зарисовать внешний вид гемометра Сали и вспомогательное оборудование к нему. Подписать составные части гемометра.

РИСУНОК (гемометр Сали)

Ход работы. В градуированную пробирку налить 0,2 мл 0,1 н раствора НСl. Затем с помощью микропипетки взять 20мм³ крови, и обтерев кончик пипетки фильтровальной бумагой, выдуть кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оказался неокрашенным. Не вынимая пипетки, сполоснуть ее соляной кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пипетки перемешать, ударяя пальцем по ее стеклу и оставить стоять на 5 мин (время, необходимое для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин). Затем к раствору по каплям добавлять дистиллированную воду (раствор при этом перемешивать стеклянной палочкой) до тех пор, пока цвет полученного раствора не совпадет с цветом стандарта. Цифра на уровне нижнего мениска покажет содержание гемоглобина в исследуемой крови.