Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Устройство камеры и сетки Горяева

Камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, прорезанное четырьмя поперечными бороздами. Борозды делят стекло на пластинки — две боковые и среднюю. Средняя пластинка на 0,1 мм ниже боковых. Она разделена поперечной бороздкой на 2 равные части. На каждой половине средней пластинки нанесена сетка Горяева. Принадлежностью камеры служит шлифованное покровное стекло. Его следует наложить так, чтобы оно покрыло обе боковые и среднюю пластинки. Нажимая большими пальцами на края стекла, его притирают к боковым пластинкам до появления радужных колец (кольца Ньютона).

Так как боковые пластинки выше средней, между нею и покровным стеклом остается щель. Это и есть камера, в которую заливают разведенную кровь. Глубина камеры 0,1 мм.

Нанесенная на дно камеры сетка Горяева квадратная. Сторона ее - 3 мм, площадь - 9 мм^». Сетка разграфлена на 225 больших квадратов - 15 по горизонтали и 15 по вертикали. Часть больших квадратов (через два на третий) разделена на 16 малых квадратов. Сторона малого квадра­та равна 1/20 мм.

Техника подсчета.

Правильное заполнение счетной камеры разведенной кровью обеспечивает точность под­счета форменных элементов. Перед заполнением камеры содержимое пробирки перемешивают, вращая ее между ладонями в течение 2 мин. Разведенную кровь наносят на среднюю пластинку камеры пастеровской пипеткой с баллоном или стеклянной палочкой, помещая ее около края покровного стекла. По закону капиллярности жид­кость затекает под стекло, заполняя камеру.

После заполнения камеру нужно положить на стол на 2-3 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится, и клетки не расположатся неподвижно на фоне квадратов сетки. При заполнении камеры жидкость не должна стекать в борозды. Недопустимо попадание в камеру пузырьков воздуха.

Подсчет производят под малым" увеличением микро­скопа (об.8, ок.10 или 15), конденсор должен быть опущен, а диафрагма закрыта.

Возможные ошибки при подсчете:

Правила:

- к данному квадрату принадле­жат клетки, находящиеся большей своей половиной внут­ри него;

- клетки, разделенные пограничной линией попо­лам, считают только на верхней и левой границе квадрата;

- клетки же, лежащие большей своей половиной вне данно­го квадрата не считают вовсе.

Принцип. Подсчет эритроци­тов под микроскопом в определенном количе­стве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведе­ния крови.

Реактивы. 0,9 % раствор хлорида натрия

Специальное оборудование. 1. Счетная камера Горяева. 2. Микроскоп.

Ход исследования. Разводят иссле­дуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую про­бирку отмеривают 4 мл реактива 1 или 2. Пипет­кой набирают 0,02 мл крови. Кончик пипетки вы­тирают фильтровальной бумагой или марлей, и кровь выдувают на дно пробирки; пипетку тща­тельно промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и остав­ляют стоять до момента счета (рекомендуется считать эритроциты в ближайшие 2-3 ч после взятия крови, а при гемолитических и. В 12-дефи­цитных анемиях — сразу после взятия, так как эритроциты могут разрушиться). Недопустимо оставлять взятую кровь с несосчитанными эри­троцитами на следующий день, так как эритро­циты частично разрушаются.

Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и покровное стекло, за­тем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая на стекло таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это сви­детельствует о требуемой высоте камеры — 0,1 мм).

Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько раз тщатель­но встряхивают содержимое пробирки, затем пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно без пузырьков воздуха запол­нила всю поверхность камеры с сеткой, не зате­кая в бороздки. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении 1 мин (ДЛЯ ОСЕДАНИЯ эритроцитов).

Для подсчета эритроцитов - микроскоп (объектив на 8х, окуляр на 10Х), находят верхний левый край сетки. Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах.

Расчет количества эритроцитов:

производится по следующей формуле:

Х= а? 4000? в

б

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови;

а — количество формен­ных элементов, сосчитанных в 80 малых квадратов;

б— количество сосчитанных малых квадратов;

в — степень разведения крови; 1\4000 мкл — объем малого квадрата; умножая на 4000, приводим к объему 1 мкл крови.

Сокращенная формула: Х= а х10000