Определение жизнеспособности клеток

Определение жизнеспособности клеток производится методом суправитальной окраски 0,1% раствором трипановой сини.

Hа предметное стекло наносят каплю взвеси клеток и 1 каплю 0,1% раствора трипановой сини. Через 30-60 с окрашенную каплю взвеси покрывают покровным стеклом. Избыток суспензии удаляют промакиванием фильтровальной бумагой и под микроскопом подсчитывают число живых (неокрашенных) и погибших (синих) клеток на 100 кариоцитов. Выводят процент гибели клеток.

Раствор трипановой сини готовят заранее. Порошок растворяют в бидистиллированной воде из расчета получения 0,2% раствора, который фильтруют. Это маточный раствор. Рабочий раствор приготовляют перед опытом: маточный раствор разбавляют 4,25% раствором хлористого натрия до нужной концентрации (1 капля гипотонического физиологического раствора + 3 капли трипановой сини).

Вопросы и задания

1. Дайте определение инбредных животных.

2. Опишите принцип получения конгенных линий мышей.

3. Какие биологические материалы используются для исследования иммунной системы?

4. Перечислите основные этапы получения клеток костного мозга у мышей.

5. Перечислите основные этапы выделения клеток из периферических органов мышей.

6. Как подсчитать количество клеток в 1 мл клеточной суспензии и определить жизнеспособность клеток?