2015-05-10
2261
Цели и задачи: изучить классификацию и роль липидов в организме; процесс переваривания липидов в желудочно-кишечном тракте; исследовать роль липазы и желчных кислот в переваривании липидов; изучить основные функции и пути обмена холестерина в организме; провести определение содержания общего холестерина в сыворотке крови.
Студент должен:
- знать: определение липидов, их классификацию, механизм переваривания и всасывания липидов в желудочно-кишечном тракте, роль панкреатической липазы в расщеплении липидов, функции желчных кислот; химическую природу и строение холестерина, содержание холестерина в тканях, функции холестерина в организме, сущность понятий «гиперхолестеринемия» и «гипохолестеринемия»;
- уметь: проводить химический эксперимент по определению влияния желчных кислот на активность панкреатической липазы, строить графики на основе полученных экспериментальных данных, проводить расчеты активности фермента; количественно определять общий холестерин в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис – Зака, пользоваться калибровочным графиком;
- владеть: техникой титриметрического метода анализа, приемами работы с фотоэлектроколориметром, методикой сбора и анализа данных эксперимента.
Оборудование и реактивы: желчь, молоко, 1% спиртовой раствор фенолфталеина, 10% раствор гидроксида натрия, 0,1 н раствор гидроксида натрия, панкреатин, ледяная уксусная кислота, рабочий раствор хлорида железа, стандартный раствор холестерина, дистиллированная вода, фотоэлектроколориметр, пробирки, мерные цилиндры, конические колбы, бюретки, аналитические пипетки, стаканы на 50 мл.
Опыт 1. Переваривание жиров. Влияние желчных кислот на активность панкреатической липазы .
Расщепление жиров в кишечнике происходит главным образом при участии липазы поджелудочной железы. Триацилглицерины распадаются на β-моноацилглицерин и жирные кислоты. Жирные кислоты можно обнаружить титрованием щелочью. Соли желчных кислот эмульгируют жиры, увеличивая их поверхность соприкосновения с липазой, а также активируют липазу.
В стакан наливают 20 мл молока и нейтрализуют, приливая 2 капли раствора фенолфталеина и по каплям 10% раствора гидроксида натрия до слабо-розовой окраски. Из нейтрализованного молока готовят опытные пробы согласно таблице 1. В качестве источника липазы используют препарат панкреатин. Пробы оставляют при комнатной температуре.
Таблица 1
| № пробы | V молока, мл | m панкреатина, мг | V желчи, мл | V воды, мл |
| - | ||||
| - | ||||
| - | - |
Через каждые 15 минут от начала инкубации пробы титруют 0,1 н. раствором NaOH до слабо-розовой окраски, после чего вновь оставляют при комнатной температуре. Количество израсходованной щелочи фиксируют в таблице 2. Каждый раз оттитровывается то количество жирных кислот, которое освобождается из жира молока при его гидролизе липазой за 15 минут.
Таблица 2
| № пробы | Результаты титрования (в мл) 0,1 н раствором NaOH через t, мин: | |||
Напишите уравнение расщепления триацилглицерина липазой. Изобразите графически динамику расщепления жира липазой для каждой пробы, откладывая на оси абсцисс время в минутах, а на оси ординат - количество 0,1 н. раствора NaOH (в мл), израсходованного на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся за данное время.
Выразите активность липазы как концентрацию карбоксильных групп жирных кислот, образовавшихся в 100 мл молока за все время исследования, пользуясь следующей формулой:
, где
С – концентрация СООН-групп, образующихся в 100 мл молока (г/100 мл);
mэ – эквивалентная масса карбоксильной группы, г/моль-экв;
0,1 – нормальность раствора NaOH;
V – объем 0,1 н. раствора NaOH, израсходованный на титрование 5 мл молока за все время инкубации (сумма всех титрований), мл;
100 – объем молока, мл;
5 – объем молока в титруемой пробе, мл.
На основании хода кривых на графике и проведенных расчетов сделайте вывод о зависимости активности липазы от присутствия желчных кислот.
