2015-05-10
1507
Цель работы: определение количества спорообразующих бактерий методом посева
Оборудование: ( см описание)
Ход работы:
Картофельная болезнь вызывается развитием в мякише хлеба спорообразующих бактерий Bacillus subtilis (сенная палочка) и Bacillus mesentericus (картофельная палочка), распространенных в природе – почве, воздухе, растениях. Бактерии попадают в муку при размоле зерна, которое заражается главным образом, в процессе уборки, поэтому мука всегда может быть обсеменена в различной степени сенной и картофельной палочкой. Указанные два вида бактерий имеют много общего. Это подвижные прямые палочки со спорами овальной формы, развивающиеся в анаэробных условиях. Различаются они по характеру строения колоний и активности ферментов.
Картофельная палочка при благоприятных условиях быстро размножается. Оптимальными условиями для развития её спор является температура 35 – 40oС, наличие влаги, питательной среды, пониженной кислотности. Её клетки не выдерживают нагрева до 80oС, а споры остаются жизнеспособными при 120oС в течение часа, Поэтому бактерии во время выпечки погибают, а споры – нет (т.к. мякиш при выпечке прогревается до температуры 95 – 97oС). Кислая среда угнетает развитие картофельной палочки, поэтому в ржаном хлебе, обладающем высокой кислотностью, картофельная болезнь встречается редко.
|
|
|
Пораженный картофельной болезнью хлеб приобретает неприятный специфический запах, имеет липкий мякиш, который при сильном поражении тянется нитями.
Исследуемую навеску муки (5 г) переносят с соблюдением правил асептики в колбу с 45 мл стерильной воды и осторожно взбалтывают (разведение 1:10). Затем стерильной пипеткой берут 1 мл разведения и переносят его в пробирку с 9 мл стерильной воды (разведение 1:100). Содержимое пробирки взбалтывают и нагревают в течение 10 минут на водяной бане при температуре 95 – 97oС (температура мякиша хлеба при выпечке), при этом вегетативные клетки бактерий погибают, а споры остаются жизнеспособными. Затем новой стерильной пипеткой тщательно перемешивают суспензию и 1 мл суспензии переносят стерильной пипеткой в стерильную чашку Петри. Приоткрыв под углом крышку чашки Петри, заливают дно чашки 15 – 20 мл расплавленного и остуженного до 48 – 50oС мясо-пептонного агара. Крышку чашки Петри закрывают и тщательно перемешивают легким вращательным движением чашки по поверхности стола имеющуюся в ней суспензию с питательной средой, после чего чашки Петри оставляют на горизонтальной поверхности до застывания агаризованной питательной среды.
Чашки с засеянными средами помещают в термостат на 2 – 3 суток при температуре 37oС для выращивания микроорганизмов. После выращивания подсчитывают количество колоний. Предполагается, что каждая колония образовалась из одной споры. Содержание микроорганизмов в 1 г муки М вычисляют по формуле
|
|
|
М = А·10n, где А – число колоний; 10 – коэффициент разведения; n – порядковый номер разведения (n = 2).
При наличии:
- до 200 спор в 1 г муки – она считается нормальной;
- от 200 до 1000 спор – сомнительной (мука повышенной обсемененности, подлежит немедленной реализации);
- от 1000 спор и более – сильно обсемененной и непригодной к употреблению.
