2015-05-30
558
Провести индикацию и титрование по Аппельману дизентерийного бактериофага в сточных водах. Используя готовые демонстрационные посевы учесть результаты: а) индикации бактериофага; б) определения титра бактериофага; в) определения титра бактериофага после пассирования. Оформить протокол в виде рисунков. Сделать вывод по каждому этапу исследования.
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
На первом этапе проводят индикацию дизентерийного бактериофага в сточных водах методом фаговой дорожки:
а) на чашку Петри с МПА засевают газоном культуру дизентерийных бактерий, затем на поверхность посева закапывают фильтрат сточной воды стекающей каплей. Посевы инкубируют в термостате в течение 18 ч. При положительном результате проводят определение исходного титра бактериофага по Аппельману (второй этап).
б) Для титрования фага готовят его десятикратные разведения, в которые добавляют эталонную культуру дизентерийных бактерий (2 млрд. м.т. в 1 мл). Пробирки помещают в термостат на сутки.
|
|
|
в) Если титр недостаточен (необходимый титр для лечебных бактериофагов должен быть не менее 10-8), бактериофаги несколько раз пассируются на дизентерийных клетках, а затем вновь титруются.
Примечание: при достижении необходимого титра бактериофаг стерилизуется фильтрованием через бактериальные фильтры, проходит контроль на стерильность и расфасовывается в стерильные ампулы или флаконы (третий этап).
З а д а н и е №2
По готовым посевам определить титр дизентерийного бактериофага по методу Грациа. Оформить протокол в виде таблицы и рисунка. Сделать вывод.
| Номер исследуемой пробы | Число «стерильных пятен» фага, полученных при посевах проб в разведениях | Число фаговых частиц в 1 мл | ||
| 10-5 | 10-6 | 10-7 | ||
М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я
В пробирках готовят десятикратные разведения фага (от 10-2 до 10-7) в 0,5 мл физиологического раствора, которые смешивают со стандартной культурой дизентерийных бактерий в объеме 0,5 мл. В каждое разведение бактериофага добавляют расплавленный и слегка остуженный МПА. Полученные смеси наслаивают на чашки Петри с МПА вторым агаровым слоем (каждое разведение фага в отдельную чашку), после застывания агара чашки инкубируют в термостате в течение 24 ч при 37°С.
Для определения титра по Грациа бактериофага необходимо подсчитать количество «стерильных пятен», умножить на степень разведения фага и объем из расчета на 1 мл.
