Дифференциальные среды для энтеробактерий

Среда Эндо. К 100 мл расплавленного горячего МПА или агара Хоттингера, рН 7,б асептически добавляют 1 г химически чистой лактозы, растворенной в 5 мл стерильной дистиллированной воды, и перемешивают. Среду охлаждают до 70⁰С и прибавляют смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина и 1 2.5 мл свежеприготовленного (см. ниже) раствора сульфита натрия. После пе­ремешивания среду разливают в чашки Петри. Для подсушивания агара чашки ставят в термостат при 37⁰С. Готовая среда хранению не подлежит.

Приготовление насыщенного раствора основного фуксина. 20 г красителя вносят в стерильную колбочку, вливают 20 мл этилового спирта 96⁰, закры­вают резиновой пробирки, перемешивают и дают отстояться в течение суток. Об­разовавшийся раствор краски сливают, фильтруют через бумагу в колбочку, плотно закрывают и обвязывают колпачком. Хранят в темном месте. В случае выпадения кристаллов раствор надо перефильтровать.

Приготовление раствора сульфита натрия. Навеску безводного химически чистого препарата (1 часть) растворяют в 9 весовых частях дистиллированной воды, а кристаллический препарат (Nа2S0з·7Н20) - в 4 весовых частях воды. Тот или иной раствор готовят перед употреблением.

Смесь растворов фуксина и сульфита натрия перед внесением в агар надо проверить. В холодном состоянии она имеет золотисто-розоватый цвет, при по­гружении в кипящую воду становится винно-красной, а при охлаждении при­нимает первоначальный цвет. Если же смесь остается розовой или красной, в нее добавляют по каплям раствор сульфита натрия до получения золотисто-ро­зоватого цвета. Если смесь подтитрована хорошо, то при ее добавлении горячая среда Эндо имеет красноватый цвет, а после застывания в чашках она бесцвет­ная или бледно-розовая.

Колонии сальмонелл на среде бесцветные или голубоватые, колонии эшерихий красные.

Среда Левина (эозин-метиленблау-лактоза-агар). К 1 л дистиллированной воды добавляют 1 % пептона (лучше пептона Дифко), 0,2 % двухосновного фос­фата калия и 2-3% промытого агар-агара; кипятят на медленно, м огне до пол­ного растворения компонентов и доводят объем дистиллированиои водои до 1 л. Разливают в колбы по 90 мл и стерилизуют при 1 ати 30 мин.

Перед употреблением агар расплавляют и на 90 мл среды стерильно до­бавляют 5 мл 20%-ного раствора лактозы, 2 мл 2%-ного водного раствора жел­того эозина и 2 мл 0,32%-ного водного раствора метиленовой сини. Среду пе­ремешивают, охлаждают до 50⁰С и разливают в чашки. После застывания она имеет красно-фиолетовый цвет. Хранению не подлежит.

Колонии сальмонелл на среде бесцветные, прозрачные колонии эшерихии фиолетовые, блестящие.