Схема ТСХ-скрининга веществ кислотного и слабоосновного характера

Условия исследования:

Пластинки «Silufol» - силикагель, закреплённый крахмалом на алюминиевой подложке. Система растворителей - хлороформ-ацетон 9:1. Время насыщения камеры - 20 минут. Высота подъёма фронта растворителей - 10 см.

Реагенты для обнаружения:

10% водный раствор FeCl₃ - производные пиразолона;

5% раствор HgSO₄ - производные барбитуровой кислоты (белые пятна на сером фоне);

0,1% раствор дифенилкарбазона (ДФК) в хлороформе - производные барбитуровой кислоты.

Методика исследования:

Полученные при изолировании аликвоты А_К и Б_К упаривают в токе воздуха до объёма 50-100 мкл. По 1/4 части аликвоты А_К наносят в зоны A и C. Остаток этой аликвоты используют для подтверждающего исследования. В зону В наносят метчик из группы производных пиразолона, в зону D метчики из группы производных барбитуровой кислоты (барбитал обязательно). В зону Е количественно наносят полосой аликвоту Б_К. Хроматограмму в зоне Е используют в дальнейшем для количественного определения.

После хроматографирования пластинку подсушивают и обрабатывают зоны А и В раствором FeCl₃. Зоны С, D и Е при этом закрывают стеклом. Пластинку подсушивают и обрабатывают зоны С и D последовательно раствором HgSO₄ в серной кислоте и раствором ДФК в хлороформе. Зоны А, В и Е при этом должны быть закрыты стеклом. После подсушивания снимают копии с пластинки и рассчитывают значения R_f и R_S.

В зоне Е снимают слой сорбента в участках, расположенных на одном уровне с пятнами, проявившимися в зонах А и С и помещают в пенициллиновые флаконы. Флаконы маркируют.

При необходимости с оставшейся частью аликвоты А_К проводят подтверждающее химическое исследование.

Таблица 1.

Значения R_f и R_S (по барбиталу) для веществ кислотного и слабоосновного характера