2015-06-05
1081
Метод основан на способности бактерий рода сальмонелла расти на дифференциально-диагностических средах (см. вклейку, ил. II) и давать реакцию агглютинации со специфическими сальмонеллезными сыворотками.
Навесок продукта в количестве 25 г засевают в 100 мл среды обогащения (магниевую или селенитовый бульон). Посевы помещают на 18–20 ч в термостат при температуре +37_С.
На второй день исследования из сред обогащения делают высев в чашки Петри на плотные дифференциально-диагностические среды: висмут-сульфитный агар (ВСА), среду Плоскирева, Левина или Эндо. Перед посевом среду необходимо подсушить в термостате, чтобы выросли изолированные колонии.
Посевы на средах Эндо и Плоскирева термостатируют в течение 15–18 ч, на среде ВСА — 48 ч при температуре +37_С. На ВСА сальмонеллы образуют черные с металлическим блеском колонии, цвет питательной среды под колониями также черный. Исключение составляют S. paratyphi, S. choleraesuis и ряд других, растущих в виде мелких серовато-зеленых колоний с черным центром и без него. Кишечная палочка на ВСА образует бесцветные, зеленоватые или серые колонии или не дает роста.
На среде Эндо колонии сальмонелл бесцветные, бледно-розовые, выпуклые. На средах Плоскирева и Левина колонии прозрачные, голубоватые, бледные или нежно-розовые.
С дифференциально-диагностических сред отсевают несколько колоний на трехсахарный агар с мочевиной или в пробирки со средой Клиглера с мочевиной: посевы делают сначала штрихом по скошенной поверхности, а затем уколом в столбик, после этого выдерживают в термостате при температуре +37_С 24 ч. На этих средах учитывают способность культуры ферментировать глюкозу, лактозу и мочевину. Для сальмонелл характерно разложение глюкозы с образованием газа, лактозу и мочевину они не расщепляют. Свежая среда — трехсахарный агар с мочевиной, — имеет розовый цвет. Отсутствие изменения цвета скошенной поверхности после посева указывает на то, что лактоза и сахароза не разлагаются изучаемой культурой. Окрашивание столбика в желтый цвет, образование газа (разрывы в глубине агара) и сероводорода (почернение) указывают на рост бактерий из рода сальмонелл.
Желательно выросшую культуру со среды Клиглера или стрехсахарного агара отсеять на скошенный МПА, короткий пестрый ряд, включающий среды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой, мальтозой. Для определения индола и сероводорода посев делают на рыбо- или мясопептонный бульон, после чего над посевом между пробкой и стенкой пробирки закрепляют узкую полоску фильтровальной бумаги, смоченную уксуснокислым свинцом для определения сероводорода и раствором щавелевой кислоты для определения индола. Посевы термостатируют при температуре +37_С в течение 24 ч.
Таким образом, к сальмонеллам относятся бактерии, не разлагающие лактозу, сахарозу и мочевину, ферментирующие глюкозу, маннит и мальтозу с образованием газа, продуцирующие сероводород и не образующие индол.
Для окончательного заключения с выделенной культурой ставят РА на предметном стекле с поливалентной, О- и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками. В случае положительной реакции агглютинации на предметном стекле делают окончательный вывод о присутствии в исследуемом продукте сальмонелл.
