Метод мембральных фильтров

Суть данного метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема исследуемой воды на поверхности мембранных фильтров и выращивании их на поверхности агара Эндо с последующим учетом количества БГКП в 1 л воды. Метод мембранных фильтров экономичнее и дает возможность узнать ответ на 2_й день.

Первый день. Готовят прибор Зейтца: предварительно его автоклавируют или протирают спиртовым тампоном, далее в пламени спиртовки обжигают металлические детали. Готовят мембранные фильтры № 3 из нитроцеллюлозы, с диаметром пор 0,7 мкм, которые задерживают на своей поверхности БГКП. Фильтры осторожно, не допуская скручивания, кипятят 10–15 мин в дистиллированной воде, затем с соблюдением правил асептики помещают на сетку фильтрационного прибора Зейтца матовой поверхностью вверх (можно заранее поставить на этой стороне точку карандашом).

В воронку прибора наливают исследуемую воду, а в приемной колбе Бунзена создают вакуум при помощи водоструйного насоса. Исследуемая вода процеживается через мембранный фильтр и бактерии, находившиеся в ней, остаются на поверхности. После окончания фильтрации воды мембранный фильтр переносят на поверхность агара Эндо в чашках Петри. Чашки помещают в термостат при температуре +37_С на сутки. Через поры мембранного фильтра происходит диффузия питательных компонентов среды Эндо, вследствие этого оставшиеся БГКП размножаются и за сутки на поверхности

фильтра каждая палочка образует типичные колонии — красные с металлическим оттенком, количество которых обязательно подсчитывают.

Второй день. Учитывают наличие или отсутствие колоний на поверхности фильтров, находящихся на агаре Эндо в чашках Петри:

-отсутствие колоний на поверхности фильтра или наличие колоний, не характерных для БГКП, позволяет дать отрицательный ответ на присутствие кишечной палочки в исследуемом объеме воды;

-при наличии на фильтре красных с металлическим блеском колоний их количество подсчитывают и из них готовят препараты, окрашивают по Граму, микроскопируют. При обнаружении грамотрицательных палочек ставят оксидазную пробу (методика постановки описана в теме 8).

Отрицательная проба на оксидазу свидетельствует о наличии в воде кишечной палочки, которая учитывается.

В этом случае вычисляют коли-титр и коли-индекс исследуемой воды. Зная показатель коли-титра, можно определить коли-индекс: для перевода коли-титра в коли-индекс 1000 делят на показатель коли-титра, а для перевода коли-индекса в коли-титр 1000 делят на число, выражающее коли_индекс.

Например, при исследовании пробы воды профильтровано 3 объема по 100 мл. На первом фильтре выросло 3 колонии, на втором фильтре — 2, на третьем — 10, т. е. в общей сложности на трех фильтрах выросло 15 колоний.

Колт-титр этой воды будет равен:

300/15 = 20 мл.

т. е. 20 мл — это наименьший объем воды, в котором находится одна кишечная палочка.

Теперь, зная коли-титр, мы определяем коли-индекс по формуле:

коли-индекс воды = 1000/коли-титр = 1000/20 = 50;

коли-титр воды = 1000/коли-индекс = 1000/50 = 20.

Таким образом, коли-индекс исследуемой воды равен 50, т. е. в 1000 мл воды находится 50 кишечных палочек. Такой водой пользоваться нельзя, так как коли-индекс питьевой воды должен быть не более 3.

Санитарными правилами и нормами (СанПиНом) для питьевой воды установлены следующие нормативы бактериологических показателей:

-количество МАФАнМ в 1 мл— не более 100;

-коли-титр — не менее 333;

-коли-индекс не должен превышать 3 кишечных палочек в 1000 мл.

Вода открытых водоемов считается доброкачественной, если:

-количество МАФАнМ в 1 мл— не более 1000;

-коли-титр — не менее 111;

-коли-индекс — не более 9.

Наличие в воде патогенных бактерий устанавливают путем посева на дифференциально-диагностические и элективные питательные среды с последующей их идентификацией методами, принятыми в бактериологии.