Подготовка материала к исследованию в трансмиссионной электронной микроскопии

1. Взятие материала для фиксации.

Кусочки органа или ткани сразу же после иссечения у животного помещают на пробку или фильтровальную бумагу, смоченную фиксатором. С помощью пинцета и лезвия из небольших кусочков аккуратно нарезают кусочки размером не более 1-1,5 мм³. Очень важно, чтобы кусочки имели размер не выше указанного: в противном случае их внутренние части будут фиксированы не полностью или совсем не фиксированы. Нарезанные кусочки быстро перемещают в фиксирующую жидкость.

Фиксация.

Цели фиксации: 1) остановить посмертные изменения, 2) сохранить ткань в состоянии, по возможности наиболее близком к прижизненному. Фиксирующие вещества, используемые в электронной микроскопии, применяются обычно в водных растворах (величина pH этих растворов поддерживается на уровне физиологических значений при помощи буфера).

Для фиксации обычно используют 2,5% глутаровый альдегид. Этот метод предложен в 1963г. D.Sabatini и соавт. Действие фиксатора условно сводится к образованию связей между молекулами клеточных мембран и мембран органелл в прочную единую сеть. Альдегиды в основном активно «сшивают» клеточные белки. Глутаровый альдегид обеспечивает лучшую сохранность морфологических образований в поверхностном слое клеток, а также тонких внутриклеточных структур. Кроме того, глутаровый альдегид относительно быстро проникает в ткани. Вдыхать пары глутаральдегида не рекомендуется; при попадании на кожу он может вызвать дерматит.