ЗАЛИВОЧНЫЕ СРЕДЫ
Для получения тонких (до 6 мкм) гистологических срезов необходимо фиксированный и промытый материал залить в плотную среду, предварительно пропитав ею кусочки тканей. В зависимости от способа растворения все заливочные среды разделяют на растворимые в органических растворителях и водорастворимые. К первым относятся парафин, пластические полимеры на основе парафина, целлоидин, ко вторым — желатин, полиэтиленгликоли, полиэфиры, некоторые метакрилаты и т.д.
Заливка ткани в парафин
Парафин — смесь высокомолекулярных предельных углеводородов, продукт перегонки нефти; растворяется в анилине, бензоле, бергамотном масле, целлозольве, хлороформе, декалине, диоксане, бутаноле, пропаноле, толуоле, трихлорэтилене, ксилоле. Каждый из этих растворителей можно использовать в качестве промежуточной среды между спиртом и парафином. Температура плавления различных парафинов от 27 до 62 °С. В гистологической технике применяют парафин с температурой плавления 56 °С. Зарубежные фирмы производят специальный парафин для гистологических исследований, содержащий различные пластические полимеры, такие как диметилсульфоксид. Их коммерческие названия «Парапласт», «Парапласт плюс», «Гистопласт С», «Гистозес».
|
|
Важнейшим условием успешной заливки материала является своевременная смена реактивов в процессе их загрязнения, а также соблюдение рекомендуемых временных и температурных параметров. Кроме того, нужно стремиться к тому, чтобы одновременно заливать одинаковые по толщине и плотности кусочки ткани.
Схема Меркулова | Схема Волковой—Елецкого | |
Фиксация: | · формалин 10 % 24 ч · спирт-формол 24 ч · жидкость Карнуа 2 – 4 ч · спирт 96-100% 2 – 24 ч · промывание в проточной воде 12 - 24 ч |
Обезвоживание: | · спирт 96 % I 24 ч · спирт 96 %II 2 ч · спирт 100 % I 24 ч · спирт 100 % II 2 ч | · спирт 50% 2 - 4 ч · спирт 60 % 2 - 4ч · спирт70% 12 - 24ч · спирт 96 %I 12 ч · спирт 96 % II 12 ч · спирт 100 % I 1-12 ч · спирт 100 % II 12 ч |
Заливка в парафин: | · спирт+хлороформ(1:1) 6-12ч или спнрт+ксилол(1:1) 1-3ч или хлороформ 6-12ч или ксилол 1-6ч · хлороформ+парафин (1:1 — «каша») 37 "С 2-3ч или ксилол+парафин (1:1 — «каша») 37°С 1-2ч · napaфин I 56 °С 2ч · парафин II 56 °С 1ч | · спирт 100 % + хлороформ(1:1) 2-3ч · хлороформ I 1,5ч · хлороформ II 0,5ч · хлороформ III 0,5ч · хлороформ+парафин (1:1) 37°С 3-6ч · хлороформ+парафин (1:1) 56°С 0,5-1ч · парафин I 56°С 2ч · парафин II 56°С 2ч парафин III 56°С 1ч |
Другие способы заливки.
Заливка по Ромейсу ручным способом 1 вариант | Заливка по Ромейсу ручным способом 2 вариант | Заливка в парапласт с помощью автомата | Заливка в парапласт с помощью вакуум-автомата. | Быстрая заливка в парапласт с помощью автомата |
Фиксация 10% формалин 12ч | 10% формалин 12ч | Фиксация в 5 % формалине 2ч | Фиксация в 5 % формалине при 60°С 10мин | |
Промывание в проточной воде 2ч | Промывание в проточной воде 2ч | Спирт 70 % I 2ч | Спирт 70 % I 5 мин | Ацетон I 30мин |
50% спирт 2ч | 50% изопропиловый спирт 2ч | Спирт 70 % II 1ч | Спирт 70 % II 12мин | Ацетон II 30мин |
75% спирт 3ч | 75% 3ч | Спирт 96 % I 1ч | Спирт 96 % I 12мин | Ацетон III 30мин |
96% 4ч | 90% 6ч | Спирт 96 % II 1ч | Спирт 96 % II 12мин | Ацетон IV 30мин |
100% I 4ч | 100% Изопропиловый спирт I 4ч | Спирт 100 % I 1ч | Спирт 100 % I 12 мин | |
100% II 4ч | 100% II 4ч | Спирт 100 % II 1ч | Спирт 100 "оII 12мин | |
Метилбензоат I 2ч | Изопропиловый спирт+парафин (1:1) 60*С 12ч | Спирт 100 % III 1ч | Спирт 100 "оIII 12мин | |
Метилбензоат II 2ч | Хлороформ I (бензол) 1ч | Бензол I 15мин | Ацетон-ксилол (1:1) 10мин | |
Бензол 2ч | Хлороформ II (бензол) 1ч | Бензол II 15мин | Ксилол 10мин | |
Бензол+парафин(1:!) 1ч | Парапласт I 60 °С 2ч | Парапласт плюс I 60°С 15мин | ||
Парафин 60*С 8ч | Парафин 60*С 8ч | Парапласт П 60 'С 3ч | Парапласт плюс II 60°С 25мин | Парапласт плюс 60°С 30мин |
Всего 47ч | Всего 54ч | 17ч | 12 ч 27 мин | 3 ч |
Наиболее быстрым, простым, не требующим применения специальной аппаратуры методом заливки материала является способ, разработанный И. И. Золотых в патологоанатомическом отделении Института хирургии им. А. В. Вишневского.
|
|
· 96 % спирте 15 мин
· 100 % Спирт 15 мин
· Хлороформ 15 мин
· Хлороформ-парафин при 56 °С15 мин
· Парафин при 56 °С, энергично встряхивая 1 мин
· Парафин при 56 °С 45 мин
Продолжительность 2 ч 30 мин
У нас заливка проходит следующим образом:
· Формалин 10% 24 часа
· Промывка проточной водой 1 час
· спирт 70% (обезвоживание) больше 4 часов
· спирт 80% больше 4 часов
· спирт 96% больше 4 часов
· спирт+хлороформ 1:1 до 1 часа(пересушивается)
· хлороформ чистый до 1 часа
· хлороформ чистый до 1 часа
· хлороформ+парафин 1:1 37С до 1 часа
· парафин 1 56С 45 м
· парафин 2 56С 45 м
· в блоки.
Для приготовления препаратов следует:
· ксилол 1 (депарафинизация) 56С 10 м
· ксилол 2 56С 10 м
· фильтровальная бумага(промокашка)
· спирт 96% 5 м
· спирт 70% 5 м
· фильтровальная бумага
· гематоксилин 5 м
· промываем дистиллированной водой
· эозин до 2 м
· вода водопроводная
· спирт макнуть
· фильтровальная бумага
· ксилол 56С больше 10 м (для просветления)