Анализ методов диагностики ИППП

В настоящее время существует множество методов лабораторной диагностики инфекций, передающихся половым путем.

Таблица 1 – Методы диагностики некоторых ИППП

В таблице 1 представлены методы диагностики таких половых инфекций, как сифилис, гонорея, хламидиоз, трихомоноз и кандидоз. Инфекции имеют множество методов обнаружения, однако не всегда необходимо применение тех или иных диагностических методов в определенных ситуациях. Обычно для точного подтверждения диагноза используется в среднем 2 – 3метода, при этом для каждой инфекции имеется достаточно большое их количество.

Рациональна следующая система скрининга пациента на наличие сифилиса: обследование, использование нетрепонемных (реакция Вассермана, РИБТ) или трепонемных тестов (РПГА, ИФА), в случае положительного или сомнительного результата – повторное исследование для исключения внутрилабораторной ошибки, далее образцы исследуются в иммуноблоте (для подтверждения специфичности).

Оптимальным для гонореи является проведение бактериоскопии (то есть после окрашивания препарат исследуют под микроскопом) с окраской по Граму в сочетании с культуральным методом. ПЦР-диагностика также применяется для точной идентификации возбудителя и входит в программу диагностики инфекционного заболевания.

Такая комбинация методов обеспечивает высокие показатели чувствительности и специфичности. Специфичность бактериоскопического исследования достигает 96 – 99 %, это связано с тем, что данная бактерия имеет четкую морфологическую форму (в виде кофейного зерна), поэтому под микроскопом ее можно довольно точно определить.

Что касается диагностики хламидиоза, то здесь, по-прежнему, «золотым стандартом» считается культуральный метод. Чувствительность этого метода может быть повышена за счет пересевания, но даже в этом случае чувствительность метода составляет 60 – 90 %. Однако для точного выявления хламидий помимо культурального метода также необходимо использовать прямую иммунофлуоресценцию (исследование препарата под микроскопом с использованием специфических антител к антигенам) и полимеразно-цепную реакцию. Применяется и еще один метод диагностики – иммуноферментный анализ на наличие в крови специфических антител. При этом, в отличие от всех других ИППП, только для хламидий имеет смысл проводить иммуноферментный анализ на наличие в крови специфических антител, поскольку во всех остальных случаях генерализованный иммунный ответ на инфекцию возникает чрезвычайно редко.

Рекомендуемый алгоритм обследования на трихомониаз, по сути, ничем не отличается от алгоритма обследования на гонорею, представляя собой сочетание микроскопии и культурального метода, которое с наибольшей вероятностью обеспечивает получение достоверного положительного или отрицательного ответа при любой форме течения трихомонадной инвазии.

Ложноотрицательные результаты микроскопического исследования на влагалищные трихомонады неизбежны при безупречном проведении анализа, поскольку чувствительность этого метода даже в вагинальных препаратах составляет 40 – 80 %, а в цервикальных мазках это простейшее обнаруживается у 60 % пациенток с трихомониазом.

«Золотым стандартом» для выявления трихомонад считается культуральный метод. К существенным недостаткам этого метода можно отнести – длительность проведения анализа и дороговизна. Кроме того есть ограничения по жизнеспособности самих исследуемых патогенов.

Наиболее достоверные результаты обследования на трихомонаду могут быть получены при сочетании как минимум двух методов: микроскопия мазка, культуральный метод или микроскопия мазка и ПЦР.

Иммунофлуоресцентный анализ также используется для диагностики трихомониаза, однако отрицательный результат при использовании этого метода не является абсолютным, необходимо проводить дополнительные исследования.

Для диагностики кандидоза используется метод микроскопии мазков вагинального отделяемого в нативных и окрашенных по Грамму препаратах, что позволяет определить наличие гриба, его мицелия или спор; выявить наличие микробов-ассоциантов; определить принадлежность к облигатно-анаэробным видам или лактабактериям.

Культуральный метод позволяет определить родовую и видовую принадлежность грибов, их чувствительность к антифунгальным препаратам, выявить степень колонизации, наличие сопутствующей бактериальной флоры.

ПЦР применяется для диагностики диссеминированных и глубоких форм заболевания (кандидоз), то есть анализ проводится совместно с исследованием крови, биоптатов глубоких тканей, стерильных сред организма.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет провести распознавание смешанных инфекций, которые вызваны бактериями и грибами рода Candida.
Таблица 2 – Методы диагностики половых инфекций и их свойства

Таблица 2 содержит данные о свойствах основных методов диагностики инфекций передающихся половым путем.

Самыми распространенными и обладающими универсальностью методами являются микроскопия, культуральный метод и полимеразно-цепная реакция. Однако применение микроскопии часто не представляется возможным из-за особенности организации некоторых возбудителей заболеваний, недостаточным их окрашиванием или малыми размерами микроорганизмов. При этом такие свойства, как чувствительность и специфичность, не превышают 70 %.

Культуральный метод, в свою очередь, обладает почти стопроцентной специфичностью и высокой чувствительностью, но, при всей его точности, метод имеет ряд недостатков. Длительность времени проведения и дороговизна делает выделение вируса в культуре клеток проблематичным.

Следует отметить, что, несмотря на относительную дешевизну, чувствительность, специфичность и быстрые сроки некоторых методов, для получения непосредственного результата необходимо сочетание нескольких из них, кроме того, методы идентификации могут быть неприменимы для всех половых инфекций, что также стоит учитывать исходя из специфики и вида микроорганизма.

Таким образом, для точной и эффективной диагностики ИППП необходимо сочетание нескольких методов, поскольку некоторые из них способные выдавать ложноположительные или ложноотрицательные результаты в зависимости от стадии развития заболевания или наличия смешанных инфекций. Однако наиболее универсальным и точным и для непосредственной идентификации методом является ПЦР.

Преимущества метода ПЦР как метода диагностики инфекционных заболеваний:

1. Прямое определение наличия возбудителей. Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции.

2. Высокая специфичность. Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от метода иммуноферментного анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами.

3. Высокая чувствительность. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Чувствительность ПЦР-анализа составляет 10 – 1000 клеток в пробе (чувствительность иммунологических и микроскопических тестов примерно 105 клеток).

4. Универсальность процедуры выявления различных возбудителей. Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагносцировать несколько возбудителей из одной биопробы.

5. Высокая скорость получения результата анализа. Для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени.

6. Возможность доклинической и ретроспективной диагностики. ПЦР позволяет осуществить определение патогена или дефектного гена в организме ещё до развития заболевания.

7. Доступность метода. Стоимость проведения ПЦР-диагностики достаточно невысока, что позволяет практическому любому применить ее соответствующем медицинском центре или учреждении.