Основні поняття теорії седиментації. Плавуча густина часток. Константи седиментації. Принцип дії та особливості роботи основних вузлів ультрацентрифуг. Ротори та центрифугові пробірки для ультрацентрифугування. Зонально-швидкісне центрифугування. Середовище для створення градієнтів густини при зонально-швидкісному центрифугуванні. Створення градієнтів, нанесення препаратів на градієнт, вибір режимів центрифугування. Приклади фракціонування РНК, ДНК і нуклеопротеїдів у градієнті густини сахарози. Рівноважне центрифугування. Вибір солей для створення градієнтів. Центрифугування ДНК у градієнтах хлориду цезію. Виділення препаратів тотальної та плаз мідної ДНК при центрифугуванні у градієнтах хлориду цезію з бромідом етидію.
Хроматографія нуклеїнових кислот
Класифікація хроматографічних методів. Елементи теорії хроматографії. Техніка колонкової хроматографії. Гель-фільтрація нуклеїнових кислот та білок-нуклеїнових комплексів. Фракціонування нуклеїнових кислот за допомогою розподільчої та іонообмінної хроматографії. Адсорбційна хроматографія нуклеїнових кислот. Афінна хроматографія нуклеїнових кислот.
|
|
Методи кількісного визначення ферментів
Методи виділення та визначення активності ферментів. Одиниці ферментативної активності. Молекулярна та питома активність ферментів. Перерахунок на загальну кількість білка в пробі (гомогенаті). Фактори, що впливають на ферментативну активність: концентрація субстрату, активатори, інгібітори, склад буферу, температура. Методи визначення ферментативної активності. Метод Луорі для визначення концентрації сумарного вмісту білка у пробі. Побудова калібрувальних кривих. Не спряжені (неперервні) та спряжені методи дослідження активності ферментів.
Ферменти, що використовуються в генній інженерії