Векторні системи із заміщенням ділянки ранніх білків

Вектор містить сайт ініціації реплікації та ділянку пізніх білків, ділянка ранніх білків заміщена на клонований ген. Ця гібридна конструкція вводиться в спеціально підготовлені клітини зеленої мавпи, що одержали назву COS. Культуру COS одержують заражуючи клітини мавпи мутантним вірусом SV40, який містить нормальні ранні та пізні гени, але дефектну ділянку ініціації реплікації. Такі молекули ДНК не здатні реплікуватись самостійно і тому інтегрують в хромосоми мавпи, де продовжують продукувати Т-антиген SV40. Після введення в клітини COS рекомбінантного вірусу починається його реплікація та продукція білків капсиду. Гібридні молекули спаковуються у віріони.

Для використання вищевказаних векторів необхідно завершення циклу репродукції вірусу. З іншого боку будь-яка молекула ДНК, що містить ori SV40 здатна реплікуватись в COS-клітинах, оскільки в останніх присутні білки Т-антигени.

Векторна система для реплікації ДНК у вигляді плазміди в клітинах COS

Вектор збудований на основі бактеріальної плазміди pBR322, містить сайти ініціації реплікації для E.coli та вірусу SV40, ділянку раннього промотору вірусу, яка значно підсилює експресію розміщеного поблизу від неї гену, маркерний ген для E.coli, наприклад Amp. Такий вектор може реплікувуатись в клітинах E.coli та в клітинах COS.

Аналогічно, існують інші векторні системи на основі інших вірусів та культур підготовлених клітин.


Понравилась статья? Добавь ее в закладку (CTRL+D) и не забудь поделиться с друзьями:  



double arrow
Сейчас читают про: