Кристаллизация белков

Кристаллизация белков используется, 1) как завершающая стадия очистки белков; 2) для доказательства гомогенности белков; 3) как метод стабилизации белков при хранении; 4) для определения третичной структуры белков методом рентгеноструктурного анализа.

Кристаллы растут из пересыщенных растворов вследствие агрегации высокоупорядоченным способом (рис. 1.2.9), кроме того, могут образовываться и в очень разнородных смесях белков. Если примеси не находятся в пересыщенном состоянии, то агрегировать будет тот белок, который присутствует в этом состоянии, и будут образовываться его кристаллы. Чтобы началась кристаллизация, необходимо создать такие условия, в которых белковый раствор становится перенасыщенным, что приводит к белок-белковой агрегации. Для этого используют осадители (вещества, уменьшающие растворимость): сульфат аммония, полиэтиленгликоль, органические растворители.

Рис.1.2.9. Кристаллы белка каталазы

Доказательства гомогенности белка

Исследование особенностей строения и свойств фермента начинают после доказательства гомогенности белкового препарата. Для доказательства гомогенности белка используют: электрофорез; определение молекулярной массы с помощью масс-спектрометрии; метод изоэлектрофокусирования; ультрацентрифугирование; аминокислотный анализ; кристаллизацию.

ЛЕКЦИЯ 1.3