2018-01-08
639
а) первичные -получают из эмбриональной ткани, путем ее измельчения, обработки трипсином для дезагрегации (разъединения) клеток и дальнейшего культивирования
in vitroв специальной культуральной жидкости.
б) перевиваемые – получают из опухолевой ткани, они отличаются тем, что их можно культивировать неограниченно долго, меняя только культуральную среду и посуду.
В процессе культвирования на стекле получается монослой: то есть один слой клеток.
Теперь можно заразить эти клетки исследуемым материалом с предполагаемым вирусом, либо уже имеющимися вирусами. Посуду с клетками, зараженными и незараженными, культивируют в термостате при 37 градусах.
Процесс накопления вирионов в клеточной культуре длится примерно 48 – 72 часа.
Подбирая подходящие культуры, можно культивировать практически все человеческие вирусы.
Следующая стадия изучения – индикация и идентификация вирусов.
|
Методы индикации.
|
|
|
Индикация – это обнаружение вирусов непосредственно в исследуемом материале или в культуральной жидкости или в зараженных клетках.
I.Если вирионы находятся в жидкости, то обнаружить их можно с помощью реакции гемагглютинации.
Суть реакции: некоторые виды вирусов способны спонтанно склеивать (то есть вызывать гемагглютинацию) каких – либо эритроцитов. Например, вирионы гриппа склеивают эритроциты кур, некоторые аденовирусы – эритроциты крысы и т.д.
Таким образом, с помощью взвеси эритроцитов в физиологическом растворе можно обнаружить вирусы в вируссодержащей жидкости.
Рис. Схема реакции гемагглютинации
II. Если вирусы размножаются в клеточной культуре, но являются гемагглютинирующими, то можно обнаружить их с помощью реакции гемадсорбции: на культуру наносят взвесь эритроцитов, инкубируют, сливают – если культура заражена, то эритроциты прилипнут прямо к зараженным клеткам – это видно в световой микроскоп.
Рис. Реакция гемадсорбции
III.Другие эффекты:
а) вирусы вызывают разрушение монослоя – это называется цитопатогенное действие вируса - ЦПД.
б) вирусы вызывают морфологические изменения клеток: внутриклеточные или внутриядерные включения, образование синцития, симпластов (то есть слияние нескольких клеток в одно образование из-за повреждения клеточных мембран).
Разные варианты ЦПД могут быть характерными для разных вирусов, что дает возможность их дифференцировать.
Таким образом, тем или иным путем можно констатировать наличие размножающихся вирусов либо в культуральной жидкости, либо в культуре клеток.
|
|
|
Бактериофаги - это вирусы бактерий. Основная характеристика: 1.Большинство – ДНК-содержащие.
2.Разнообразны по форме.
3.Каждому виду бактерий соответствует свой бактериофаг (специфичность).
Рис. Строение бактериофага
Цикл репродукции фага в бактериальной клетке
1. адсорбция и проникновение 2. ”ранние” вирусные РНК - синтез ферментов 3. репликация ДНК фага 4. синтез “поздних” вирусных и-РНК 5. биосинтез вирусных белков, в том числе вирусного капсида 6. самосборка вирионов 7. стенка разрывается (фаговый лизоцим), выход фагового потомства
Формы взаимодействия фага и клетки
Стадии взаимодействия фага:
Адсорбция
проникновение
 |
интеграция ДНК в клеточный геном
умеренный фаг вирулентный фаг
лизогения литический цикл название процесса
профаг вирусное потомство результат
Практическое применение бактериофагов
1.Для лечения бактериальных инфекций (кишечных и раневых): так как многие бактерии в настоящее время устойчивы к антибиотикам, то целесообразно лечить наружные и кишечные инфекции бактериофагами. Преимущества: специфичность воздействия, безвредность для человека.
2. Для идентификации бактерий (определение фаговара)
Внутри видов бактерий различают варианты или подвиды, которые отличаются по наличию «собственных» фагов –фаговары. Иногда для идентификации необходимо определить и фаговар.
Чистую культуру засевают в чашки Петри, наносят капли растворов с фагами. Если фаг и бактерии соответствуют друг другу, то произойдет лизис бактериальных клеток, то есть не будет роста. Так определяется вид и фаговый вариант - фаговар
