Фиксация

Если это специально не оговорено методикой, то, как правило, фиксируют высушенные мазки. Лучшим фиксатором для цитологических препаратов является метанол. В метаноле фиксацию проводят 3-10 мин.

Кроме того, для фиксации может быть использован абсолютный этиловый спирт (100°). Время фиксации составляет 10-30 мин.

Для приготовления абсолютного спирта в лабораторных условиях используется прокаленный (безводный) медный купорос.

Приготовление безводного купороса. Берут химически чистый синий купорос (если он крупнокристаллический, то его предварительно толкут в фарфоровой ступке) и прокаливают в фарфоровой чашке. В результате прокаливания происходит удаление кристаллизационной воды из молекулы медного купороса (CuSO₄ • 5H₂O) и получается безводный купорос белого цвета (CuSO₄). При соприкосновении с водой такой безводный купорос вновь жадно поглощает воду и дает первоначальное соединение синего цвета, на чем и основано его применение для обезвоживания спирта.

Прокаливание ведут с соблюдением известных предосторожностей, а именно: мелко размельченный медный купорос небольшими порциями прокаливают на малом огне через асбестовую сетку в фарфоровой чашке (или медной посуде) при постоянном помешивании фарфоровой или стеклянной лопаткой. Нельзя пользоваться металлическим шпателем и вести прокаливание в железной и никелированной посуде. Несоблюдение указанных правил может привести к пережиганию, точнее, к разложению медного купороса с образованием окислов меди (CuO). Последнее обстоятельство весьма неблагоприятно сказывается на способности купороса поглощать воду.

Хорошо и осторожно прокаленный медный купорос должен быть совершенно белым или слегка голубоватым: при перекаливании он приобретает серый цвет. Пережженный купорос при соединении с

водой дает грязно-зеленые тона, что является нежелательным, ибо затрудняет контроль за ходом обезвоживания спирта. Очень хорошо вести прокаливание купороса на электрической плитке малой мощности или даже в термостате при температуре 60-70°; в этом последнем случае мелко растолченный купорос рассыпают тонким слоем на картоне. Прокаливание в термостате при 60-70° идет медленно, около 3 нед (при ежедневном перемешивании), а при температуре 100° - в течение 1-2 дней (в фарфоровой чашке).

При прокаливании медный купорос начинает отдавать кристаллизационную воду уже при температуре 60°, а при 100° - частично разлагается и становится серым. Прокаленный купорос хранят в банке с притертой пробкой.

Приготовление абсолютного спирта. Для приготовления абсолютного спирта прокаленный белый купорос насыпают в большую широ-когорлую банку и заливают 96° спиртом из такого расчета, чтобы слой спирта над купоросом превышал толщину слоя последнего не больше чем в 4-5 раз. Содержимое банки ежедневно взбалтывают в течение 4-5 дней, добиваясь посинения всей толщи оседающего купороса. После этого в банку подсыпают еще порцию белого купороса, но уже в меньшем количестве, примерно в 2-3 раза, и оставляют на 1-2 дня. Подсыпание купороса повторяют до тех пор, пока последняя порция его не перестанет синеть, тогда абсолютный спирт считается готовым. Такой абсолютный спирт хранится постоянно на медном купоросе и используется по мере надобности для различных целей.

Если обезвоживанию подвергается 95-96° спирт, то купорос (прокаленный) приходится добавлять не больше 1-2 раз, и выход абсолютного спирта в этом случае составляет около 60-70%. Относительно небольшой выход абсолютного спирта объясняется тем, что значительная часть его остается на купоросе.

В качестве фиксатора может использоваться смесь Никифорова (время фиксации минимум 15 мин, максимум 1-2 ч).

Некоторые красители, приготовленные на метаноле (Лейшмана, Май-Грюнвальда), являются одновременно фиксаторами. Окрашивание цитологических препаратов

Наиболее распространенными и чаще всего применяемыми красителями для цитологических препаратов являются красители, используемые для гематологических исследований. В частности, это краски Романовского-Гимзы, Лейшмана, Мая-Грюнвальда.

Качество окраски элементов клеточных структур зависит от:

• вида и состава красителя;

• концентрации красителя (не всегда определяет красящую способность);

• продолжительности окраски;

• возраста окрашиваемого препарата. Препараты от 6 ч и до нескольких дней давности в большинстве случаев теряют мелкие структурные тонкости;

• температуры воздуха в помещении в процессе окрашивания, pH среды (оказывает сильное влияние на окрашиваемость и тон окраски). По-видимому, безразлично, каким способом добавляют ионы водорода, важна только их концентрация.

При колебаниях температуры красителя (от температуры холодильника до комнатной) не обнаружено никаких различий в окраши-ваемости препаратов.