Поясните, на чем основан выбор штамма микроорганизма и вектора для конструирования рекомбинантной ДНК для создания лекарственных препаратов

Вектор - саморегулирующаяся (автономная) молекула ДНК, используемая в ГИ для переноса генов и др. последовательностей от организма донора в организм-реципиента, а также для клонирования последовательностей нуклеотидов.

3. Требования к векторной молекуле:

1. Вектор должен содержать уникальный сайт рестрикации для нескольких рестриктаз, что позволит встроить в него фрагмент чужеродной ДНК;

2. Вектор должен иметь определенную емкость и не абортировать встроенный фрагмент;

3. Вектор должен реплицироваться в определенных клетках за счет имеющейся точки начала репликации (ориджина);

4. Вектор должен содержать маркерный ген, облегчающий селекцию клеток, несущих ген.

4. Все системы клонирования должны отвечать двум основным требованиям:

5. 1. Наличию нескольких сайтов для клонирования;

6. 2. Возможности достаточно простой идентификации клеток с рекомбинантными ДНК.

7.

Использование бактерий как хозяев для рекомбинантной ДНК требует выполнения ряда условий. Организм клеток хозяина должен иметь генотип, соответствующий эффективной репликации вектора. Оптимальными характеристиками хозяина являются: быстрый рост на недорогих средах, отсутствие патогенности, способность принять чужеродную ДНК и поддержание ее стабильности при культивировании. Бесспорным лидером при выборе штамма- хозяина являются бактерии E. coli. Выбор определяют фундаментальные знания генетики и биохимии этих микроорганизмов, секвенирована полная последовательность генома этих бактерий, для них разработаны и успешно применяются генно-инженерные методы. Недостатком является потенциальная опасность, связанная с условной патогенностью E. Coli, средой обитания которых является кишечный тракт человека. Даже непатогенные штаммы E. Coli продуцируют эндотоксины, которые контаминируют выделяемые ими продукты, включая лечебные препараты (инсулин, гормон роста человека). Кроме того, секретируемые белки выделяются в периплазму и это обстоятельство затрудняет очистку, т.к. разрушение клеток ведет к дополнительной контаминации конечных продуктов. Основные достоинства B. subtilisв том, что они не патогенны и секретируют белки в среду. Тем не менее технология клонирования для них не развита так совершенно, как для E. Coli. Другим ограничение является нестабильность бациллярных плазмид.