2020-04-12
1938
Реакция радиальной иммунодиффузии (реакция Манчини). Иммунную антиглобулиновую сыворотку (анти-IgG) смешивают с расплавленным агаровым гелем и равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген (Аг) в различных разведениях. В качестве антигена используют сыворотки человека с известной концентрацией IgG и исследуемые сыворотки с неизвестной концентрацией IgG. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами антиглобулиновой сыворотки кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена (рис. 27). Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.
МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (РЕАКЦИЯ МАНЧИНИ)
Метод простой линейной иммунодиффузии основан на взаимодействии антисыворотки, содержащейся в геле агар-агара с раствором антигена образуют линии и полосы преципитации.
Судя по ширине зон преципитации в тесте простой радиальной диффузии, можно проводить количественное определение антигенов. Взаимное расположение линий преципитации в тестах двойной и встречной иммунодиффузии позволяет оценивать
иммунохимическое сходство или различие антигенных компонентов.
Методы иммунодиффузии характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью. Обычно тесты иммунодиффузии используют для идентификации
белков в биологических жидкостях, таких как сыворотка крови, цереброспинальная жидкость, секреты желез или экстракты различных органов и т. д.
Методы оценки Т-системы иммунитета. Интерпретация результатов.
Т- лимфоциты — это клетки-регуляторы, которые действуют как рубильники: включают и выключают действие иммунной системы. Команды они отдают, выделяя сигнальные молекулы, которые называются цитакинами. Эти молекулы переносят сигналы от Т-лимфоцитов к другим клеткам. B-лимфоциты вырабатывают специальные белки — антитела.
Антитела — это специальные белки, которые с удивительной точностью — как ключ, подогнанный к замку, — узнают тот субстрат, против которого они направлены. Антигены — это белки или фрагменты белков, несущие признаки чужеродности и вызывающие иммунный ответ при введении в организм. Все клетки иммунной системы — и Т-лимфоциты, и В-лимфоциты, и макрофаги — обладают способностью очень быстро мигрировать по всему организму. Лучше всего передвигаются Т-лимфоциты и вспомогательные клетки, несколько хуже — В-лимфоциты.
Для оценки Т-системы иммунитета пользуются следующими методами:
1.Метод "спонтанных" розеток (розеткообразование с эритроцитами барана) - определяют количество Т-лимфоцитов в крови.
2. Реакция бласттрансформации лимфоцитов in vitro под влиянием ФГА или в микст культуре.
3. Определение динамики бласттрансформации.
4.Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета.
Наиболее распространен тест подавления миграции макрофагов факторов; угнетающим их миграцию (MIF), выделяемым сенсибилизированными лимфоцитами под влиянием соответствующего антигена. С помощью этого метода in vitro можно установить сенсибилизацию организма к тому или иному антигену.
5. Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены (туберкулезы, трихофитин). 6. Контактная аллергия к динитрохлорбензолу (ДНХБ). Этот гаптен при накожной аппликации вызывает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа. Повторное нанесение препарата дает типичную кожную реакцию. Поскольку вероятность контакта индивидуума с данными редкими химическими соединениями ничтожна, проба ДНХБ служит весьма распространенным методом оценки способности организма развить гиперчувствительность замедленного типа, т.е. функциональной активности Т-системы иммунитета.
7. Отторжение аллогенного кожного лоскута. Эта реакция тоже относится к гиперчувствительности замедленного типа и осуществляется в основном Т-лимфоцитами. Однако трансплантация чужеродной ткани приводит к сенсибилизированному организму по отношению к трансплантационным агентам, что может оказаться нежелательным при последующем лечении больного такими методами, как пересадка костного мозга, вилочковой железы и др.
8. Биопсия лимфатических узлов и гистологическая оценка тимус-зависимых областей вилочковой железы. Эти тесты ставятся в сложных для диагностики случаях при подозрении на комбинированные иммунодефициты и злокачественные образования.
При оценке Т- системы иммунитета к скрининговым методам можно отнести кожные тесты на бактериальные антигены, определение поверхностных маркеров Т- лимфоцитов CD3, CD4, CD8, бласттрансформацию на фитогемагглютинин, к развернутым- изучение продукции цитокинов, активационных маркеров, Т- клеточных рецепторов.
