В положительном случае на границе двух жидкостей образуется фиолетовое кольцо. Кольцо может появиться не сразу, а в течение 2 – 3 мин

1 2 3 4 5

Государственное автономное образовательное учреждение

Среднего профессионального образования Республики Крым

«Евпаторийский медицинский колледж»

План занятия (практическое) № 8

Тема занятия: Определение глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами

Дисциплина: МДК 01.01Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Цели занятия:

· Изучить методы качественного определения глюкозы и кетоновых тел в моче.

План занятия:

1. Ответить на вопросы(Приложение 1) 2. Записать алгоритмы (Приложение 2).

3. Составить схему одного из качественных проб для определения глюкозы.

4. Составить схему одного из качественных проб для определения кетоновых тел. 5. Ответить на вопросы (Приложение3)

б) Задание студентам для выполнения лабораторной работы: Качественные методы определения глюкозы и кетоновых тел в моче с помощью тест-реагентов и анализаторов методом Гайнеса-Акимова, экспресс-тестами, Альтгаузена.

Задание на дом

Составление вопросников с ответами по теме лекций 8,9 повторить лекции и п/з № 1-7

Составление схемы по методам определения глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами.

Составить презентацию на тему «Глюкозурии»

Преподаватель высшей квалификационной

категории____________ к.б.н. Зейналиева Э.Н.

Приложение 1

Проверка исходного уровня знаний

1. Гликозурия или глюкозурия это —.

2. Причина ГУ вызвана в подавляющем большинстве случаев? ________

3. Последствия гликозурии? - ____________

4. Как образ-ся первичная моча? ______________________

Как происходит реабсорбция глюкозы?_______________

Каков механизм гликозурии?_________

Каковы причины гликозурии при сахарном диабете?__________

8. Под гликозурией понимают? - ________

Приложение 2

Алгоритм определения глюкозы в моче

За сутки здоровый человек с мочой выделяет меньше 2,78 ммоль глюкозы.

Качественные методы:

с помощью индикаторных полосок;
проба Гайнеса;
проба Фелинга;
проба Бенедикта и др.

Методические установки:

· Изучите и законспектируйте качественные и количественные методы определения кетоновых тел в моче;

· Разбейтесь на группы по 2-3 человека и получите образцы биологической жидкости (мочи) у преподавателя, пронумеруйте образцы;

· Проведите исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;

· Оцените полученный результат (норма, патология).

· Результат запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.

Редукционные методы основаны на редукционных свойствах альдегидной группы глюкозы. В качестве окислителя используют какую-либо легко редуцирующуюся соль, дающую при восстановлении окрашенное соединение. К редукционным пробам относятся пробы Фелинга, Тромбера, Ниландера, Бенедикта, Гайнеса.

· Алгоритм 1. Проба Гайнеса.

Принцип: Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде в гидрат закиси меди (желтого цвета) или закиси меди (красного цвета). Чтобы из гидрата окиси меди при нагревании не образовался черный осадок меди, к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди.

· ОРС: Реактив Гайнеса готовят следующим образом: 1) 13,3 г х. ч. кристаллического сульфата меди растворяют в 400 мл воды; 2) 50 г едкого кали растворяют в 400 мл воды; 3) 15 г ч. глицерина разводят в 200 мл воды. Смешивают 2-й и 1-й растворы и тотчас приливают 3-й. Реактив стойкий.

· ХО: Пробу проводят в следующем порядке: к 3-4 мл реактива прибавляют 8—12 капель мочи, кипятят или ставят в кипящую водяную баню. В присутствии глюкозы появляется желтая или красная окраска жидкости и осадок.

· Проба Гайнеса является надежной, так как при большом разведении мочи (8—12 капель мочи и 3—4 мл реактива) восстанавливающее действие других редуцирующих веществ мочи (мочевая кислота, индикан, креатин, желчные пигменты), а также некоторых лекарственных веществ (ацетилсалициловая кислота, кофеин, ПАСК) выражено слабо. Наличие большого количества белка в моче мешает правильной оценке редукционных проб, поэтому желательно предварительно его удалить, подкислив мочу несколькими каплями уксусной кислоты, нагрев до кипения и отфильтровав.

· Существует ряд экспресс-методов обнаружения глюкозы в моче с применением готовых наборов (таблетки, фильтровальная бумага, порошки). К этим наборам обычно прилагается описание сущности и правил проведения проб, анализ должен проводиться строго в соответствии с инструкцией.

· Алгоритм 2. Глюкозооксидазная (нотатиновая) проба.

Принцип: основан на окислении глюкозы ферментом глюкозооксидазой (нотатином). Образующаяся при этом перекись водорода расщепляется другим ферментом (пероксидазой) и окисляет краситель-индикатор (производное бензидина), изменяя его окраску.

ХО: Для определения глюкозы в моче индикаторную бумажку глюкотест погружают в испытуемую мочу на 1—2 с, так чтобы нанесенная на бумажку желтая полоса полностью смочилась. Через 2 мин ориентировочно определяют концентрацию глюкозы в моче путем сравнения интенсивности окраски цветной полосы с цветной шкалой, имеющейся в стандартном наборе.

К методам определения кетоновых тел в моче относятся:

Гр.: качественные методы (пробы)

· Проба Ланге

· Модифицированная проба Ротеры

· Проба Легаля

· Проба Лестраде

Гр.: полуколичественные методы

· Экспресс-тесты (диагностические тест-полоски)

Принцип обнаружения кетоновых тел в моче. Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, образуя комплекс, окрашенный в розовато-сиреневый, сиреневый или фиолетовый цвет. Чувствительность проб около 50 мг/л кетоновых тел. Полуколичественную оценку результатов можно дать в интервале от 150 до 1500 мг/л.

Алгоритм 3. Определение кетоновых тел в моче с помощью пробы Ланге.

Принцип метода: Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Посуда, реактивы, оборудование:

· Химическая пробирка;

· Секундомер (часы);

· Реактивы:

1. Уксусная кислота 80%.

2. Нитропруссид натрия (свежеприготовленный 10% раствор).

3. Аммиак.

Ход исследования:

К 12 – 15 мл мочи приливают около 1 мл уксусной кислоты и около 0,5 мл раствора нитропруссида натрия. Затем наслаивают аммиак.