Выявление возбудителей

Учет заспоренности почвы B. sorokiniana проводят после уборки урожая и перед посевом, для чего с каждого поля берут по 2 пробы почвы с глубины пашни. Первый образец на расстоянии 15 м от края поля, а второй - в середине. Пробы берут тростьевым буром в 16-24 точках поля. Масса 1 образца - 200-300 г. Почву высушивают до воздушно-сухого состояния, просеивают через проволочное сито 0,5-1 мм для удаления расти­тельных остатков. Берут навеску в 10 г. и помещают в фарфоровую ступку, увлажняют 1 мл водопроводной воды, тщательно перемешивают шпателем, добавляя 5 мл минерального масла (вазелинового, веретенного, дизельного, машинного и др.). Почву переносят в цилиндр емкостью 100 мл с притертым стеклом и добавляют 49 мл водопроводной воды. Цилиндр с содержимым встряхивают интенсивно 5 мин в вертикальном направлении. Почвенную сус­пензию отстаивают до четкого расслоения. Конидии гриба собираются в вер­хнем слое водномасляной эмульсии, почва оседает на дно цилиндра. Пипеткой в 1 мл берут из поверхностного слоя эмульсии немного масляной эмульсии и переносят по капле на предметное стекло для подсчета количества спор под микроскопом с увеличением не менее х80. Размер капель определяют опытным путем. Конидии гриба подсчитывают не менее чем в 10 каплях эмуль­сии в каждом образце почвы. Определяют количество капель в 1 мл эмульсии, конидий в 1 мл, в 6 мл. Делят результат на 10 и получают количество конидий в 1 г воздушно-сухой почвы. Обычно эмульсия содержит 90% конидий, имеющих­ся в навеске почвы [174, 154. 155].

Зараженность семян пшеницы и ячменя грибами из родов альтернария, биполарис, фузариум, пениииллиум и др. проводят согласно ГОСТ 12044-93. Анализ семян проводят во влажной камере и питательных средах. Для чего из среднего образца семян, предназначенных для определения зараженности, берут 4 пробы по 50 семян в каждой и помещают в стерильную посуду. Перед закладкой во влажную камеру (чашки Петри) семена дезинфицируют в тече­ние 5 мин в 0,5%-ном растворе марганцовокислого калия или 96%-ном ра­створе спирта и промывают стерилизованной или свежекипяченой остуженной водой. В растворе спирта семена дезинфицируют 1 мин. После этого семена просушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги. Термостат дезинфицируют 40%-ным формалином 10-12 часов., чашки Петри, кружоч­ки фильтровальной бумаги для влажных камер тщательно дезинфицируют в сушильном шкафу при температуре 130° в течение 1 час. В качестве питатель­ной среды берут картофельный агар, картофельно-глюкозный агар или пив­ное сусло с агаром. В стерильные чашки Петри диаметром 9,5-10 см наливают 10 мл простерилизованного агара. В каждую чашку Петри на фильтровальную бумагу или агаризованную среду помещают по 10 семян и ставят их для про­ращивания в термостат при температуре 22-28°. Проращивание семян про­водят в течение 6-7 суток. По колониям грибов, образовавшихся на питательных средах, и их спороношениям определяют возбудителей болезни семян.

Более доступный способ определения зараженности семян - проращива­ние их в рулонах. Тщательно промытые и простерилизованные семена раскла­дывают на полоске стерильной фильтровальной бумаги, размером 115x19 см., сложенной вдвое и смоченной до полной влагоемкости стерильной водой по заранее прочерченной линии, отступая от верхнего края 2 см. На этой полос­ке бумаги укладывают 100 шт. семян интервалом 1 см. После укладки семена покрывают смоченной полоской фильтровальной бумаги меньшего размера, поверх которой накладывают корекс или полоску утолщенной бумаги (кар­тон). Бумагу сворачивают в рулон и помещают в стеклянный сосуд, который ставят в термостат при температуре 20° на 7-8 дней. Во время проращивания рулоны необходимо периодически увлажнять, добавляя стерильную воду в стеклянный сосуд.

Первый просмотр проводят одновременно с определением энергии про­растания на 3-4-ый день, второй - одновременно с определением всхожести на 7-8-й день. По истечению указанного срока на семенах появляются харак­терные признаки болезней.

Анализ зараженных растений проводят на тех же питательных средах, что и семян. Для чего вырезают кусочки пораженной ткани (корня, стебля, эпи-котиля и др.) размером 1,0-1,5 см., тщательно промывают их под струй водо­проводной воды (1 час), стерилизуют (в спирте или марганцевокислом калие), промывают стерилизованной или свежекипяченой остуженной водой, просу­шивают между листами стерильной фильтровальной бумаги, раскладывают по 10 штук на питательную среду в каждую чашку Петри.

 Лекция №4(Л-4) – 2 час.