Бактериологическое исследование

Материал для исследования. Свежие трупы павших или убитых с диагностической целью больных животных целиком, голова, трубчатая кость, доля печени с желчным пузы­рем, почка, селезенка, сердце, перевязанное лигатурой вблизи аорты, бры­жеечные лимфоузлы, отрезок пораженного участка тонкого отдела кишеч­ника, перевязанный с двух сторон лигатурой.

Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют фекалии животных с клиническими признаками диареи.

Микроскопическое исследование исходного материала. Мазки-отпечатки из исследуемого материала окрашивают по Граму и микроскопируют. Протеи имеют форму палочек размером 1-3 х 0,4-0,8 км. Встречаются нитевидные формы. Грамотрицательные.

     Выделение и идентификация культур протея

Культивирование. Протеи — факультативные анаэробы, хемоорганотрофы, обладающие и дыхательным и бродильным типами метаболизма. Оптимальная темпера­тура роста 37° С, но способны расти в диапазоне температур от 10 до 43° С. Оптимальная рН среды 7,2 -7,4. Хорошо растут на всех общих питательных средах, их рост сопровождается неприятным гнилостным запахом.

Пробы фекалий, содержимое тонкого отдела кишечника или соскоб с его слизистой оболочки в количестве не более 0,5 г суспендируют в 10 см³ стерильного физиологического раствора, выдерживают для осаждения крупных частиц при комнатной температуре 10-15 мин и надосадочную жид­кость используют для посевов. Фекалии, консервированные глицерином, тщательно в нем размешивают, полученную суспензию разводят стериль­ным физиологическим раствором в 5-10 раз и высевают надосадочную жидкость после осаждения крупных частиц.

Исследуемый материал высевают в пробирки с МПБ, на чашки с плот­ными дифференциально-диагностическими средами Эндо, Плоскирева или С висмут-сульфит агаром. Чистая культура роящихся форм протеев может быть получена посевом по Щукевичу (в конденсационную жидкость свежескошенного питательного агара). Для ингибирования роста других видов бактерий и выделения протеев в чистом виде рекомендуется использовать среду П-1 (Калина Г.П., 1975), содержащую полимиксин и соли желчных кислот.

Первичные посевы патологического материала инкубируют при 37 - 38° С в течение 24 -36 часов.

Характер роста протеев на питательных средах. При росте на плотных (особенно на влажных и с пониженной концентра­цией агара) питательных средах большинство штаммов обладает феноме­ном «роения» или ползучего роста. При этом наблюдают образование тон­кого сплошного вуалеобразного налета, радиалыю расходящегося от мес­та посева. При выделении чистых культур микроорганизмов с плотных питательных сред возникают затруднения, если в микробной ассоциации присутствует протей, способный к «роению». Для подавления данного фе­номена при выделении чистых культур других видов бактерий используют среды, содержащие соли желчных кислот (среда Плоскирева, висмут-суль­фит агар, агар Мак-Конки, SS-arap и др.), желчь, 0,1%-ный раствор хло­ралгидрата, 4 -7% агара, а также хорошо просушенные среды. Для этих целей рекомендует добавлять к агару перед его разливом в чашки Петри 5,5-6,0% 95%-ного этанола.

На среде Плоскирева протеи образуют крупные (диаметром 2-7 м), по­лупрозрачные изолированные колонии правильной круглой формы, слегка вы­пуклые с желтовато-розовым (перламутровым) оттенком. Среда в зоне роста колоний подщелачивается и приобретает желтизну. На висмут-сульфит агаре через 36-48 часов культивирования колонии протея имеют грязно-коричне­вый цвет, а после их снятия на среде остается темно-коричневая редукционная зона.

Нероящиеся формы протея на МПА образуют мелкие (диаметром око­ло 1 мм), круглые колонии S-формы сероватого цвета. Аналогичные ко­лонии, но бесцветные или слабо-розового цвета образуются на среде Эндо.

На кровяном агаре отдельные штаммы могут вызывать гемолиз. В МПБ вначале образуется равномерное помутнение, а затем осадок.

Морфология клеток протея в культуре. В мазках из культур протеи представляют собой полиморфные грамотрицательные палочки диаметром 0,4-0,8 мкм и длинной от 1 -3 мкм до нитевидных форм различной величины. Кроме того, в мазках можно об­наружить кокковидные и неправильных очертаний инволюционные фор­мы, иногда — сферопласты. Спор и капсул не образуют. Подвижны за счет перетрихиально расположенных жгутиков. Подвижность более выражена при температуре культивирования 20-22° С.

 Идентификация протеев по ферментативным признакам

  Протеи образуют уреазу, сероводород, редуцируют нитраты, гидролизуют желатин, растут в присутствии KCN, ферментируют Д-глюкозу с образованием кислоты и газа, оксидазоотрицательные, каталазоположительные, дают положительную реакцию с метиловым красным, не об­разуют лизиндекарбоксилазу и аргининдигидролазу. Одним из основных признаков протеев и близких к ним фенотипически провиденсий и морганелл, позволяющих отличить бактерии этих родов от дру­гих представителей семейства Enterobacteriaceae, является их способ­ность к дезаминированию фенилаланина. Признаки, позволяющие диф­ференцировать роды Proteus, Providencia и Morganella, представлены в таблице 20.