II. Этиология и Воспаление индикаторы

0 Обнаружение SARS-COV-2 нуклеиновой кислоты

1.1 Сбор образцов

Соответствующие образцы, сбор и сбор methodds времени имеют важное значение для повышения чувствительности обнаружения. Качество образца типов включают: верхние образцы дыхательных путей (глоточные тампоны, назальные мазки, носоглотки выделений), нижние дыхательные пути (образцы мокроту, выделения дыхательных путей, БАЛ), кровь, фекалию, мочу и конъюнктив [секреции. Мокрота и другие образцы нижних дыхательных путей имеют высокую положительную скорость нуклеиновых кислот и должны быть собраны преимущественно. SARS-коронавирус-2 преимущественно размножается в типе II альвеолярных клеток (AT2) и пик выделения вируса появляется от 3 до 5 дней после начала заболевания. Таким образом, если кислота испытание нуклеиновой является отрицательным в начале, образцы должны продолжать быть собраны и протестированы в последующие дни.

1.2 Обнаружение нуклеиновых кислот

кислоты Нуклеиновые испытания является предпочтительным методом для диагностики ТОРС коронавирус-2 инфекции. Процесс тестирования в соответствии с инструкциями комплекта заключается в следующем: Образцы предварительно обработаны, и вирус лизируют для извлечения нуклеиновых кислот. Эти три специфические гены SARS-COV-2, а именно открытая рамка считывания ла / B (ORFla / б), белок нуклеокапсида (N), и белок оболочки (Е) гены, которые затем усиливаются в режиме реального времени технологии количественной ПЦР. Усиленные гены обнаруживаются с помощью флуоресцентной интенсивности. Критерии положительных результатов нуклеиновых кислот являются: ген ORFla / б положительна, и / или / ген, ген Н Е являются положительными.

В сочетании обнаружение нуклеиновых кислот из нескольких типов образцов может улучшить точность диагностики. Среди пациентов с подтвержденной положительной нуклеиновой кислотой в дыхательных путях, около 30% - 40% этих пациентов обнаружили вирусную нуклеиновую кислоту в крови и примерно 50% - 60% пациенты обнаружили вирусную нуклеиновую кислоту в кале. Тем не менее, положительная скорость тестирования нуклеиновой кислоты в образцах мочи является довольно низкой. Комбинированное тестирование с образцами из дыхательных путей, кала, крови и других типов образцов полезно для улучшения диагностической чувствительности подозреваемых случаев, мониторинга эффективности лечения и управления мер изоляции после выписки.

е) Выделение Вирус и культура

Вирус культура должна быть выполнена в лаборатории с квалифицированным биобезопасности уровня 3 (BSL-3). Процесс кратко описать следующим образом: свежие образцы patient'ssputum, фекалии и т.д. получены и высевали на Веро-E6 клеток для культуры вируса. Цитопатический эффект (ЦПЭ) наблюдается через 96 часов. Обнаружение вирусной нуклеиновой кислоты в культуральной среде, указывает на успешную культуру. Вирус измерение титра: После разбавления концентрации вируса запаса на коэффициенте 10 в серии, TCIDS0 определяется микро-цитопатическим методом. В противном случае, вирусная жизнеспособность определяется бляшкообразующих единицами (БОЙ).

20 Профилактика и лечение HandbookofCOVI0-19

E) Обнаружение антител сыворотки

Специфические антитела получают после того, как ТОРС коронавируса-2 инфекции. Методы определения антител в сыворотке, включают коллоидное золото иммунохроматографию, ИФ, хемилюминесценцию иммуноанализ и т.д. Положительные сыворотки специфических ЛГМЫ или специфический титр антител LGG в восстановлении фазы ~ 4 раза выше, чем в фазе острой, может быть использован в качестве диагностических критериев при подозрении пациенты с отрицательной детекции нуклеиновой кислоты. Во время последующего мониторинга, ЛГМЫ можно обнаружить через 10 дней после начала симптомов и LGG можно обнаружить через 12 дней после начала симптомов. Вирусная нагрузка постепенно уменьшается с увеличением уровней антител сыворотки.

C, Определение показателей воспалительной реакции

Рекомендуется проводить испытания (-reactive белка, прокальцитонина, ферритина,

• -dimer, общее и субпопуляции лимфоцитов, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-а, INF-й и другие показатели воспаления и иммунного статуса, который может помочь оценить клинический прогресс, бдительная серьезные и важные тенденции, и обеспечивает основу для разработки стратегии лечения.

Большинство пациентов с C0VID-19 имеют нормальный уровень прокальцитонина с существенно повышенными уровнями (-reactive белка. Быстрое и значительно повышен (-reactive уровень белка указывает на возможность вторичной инфекции. •-dimer уровни значительно повышены в тяжелых случаях, что является потенциальным фактором риска неблагоприятного прогноза. У пациентов с низким общим числом лимфоцитов в начале заболевания, как правило, имеют плохой прогноз. Тяжелые пациенты имеют постепенно уменьшается количество лимфоцитов периферической крови. Уровни экспрессии IL-6 и IL-10 в тяжелых больных значительно увеличилось. Мониторинг уровней IL-6 и IL-10 является полезным для оценки риска прогрессирования в тяжелом состоянии.

О Обнаружение вторичных бактериальных или грибковых инфекций

Тяжелые и критически больные пациенты, уязвимы для вторичных бактериальных или грибковых инфекций. Квалифицированные образцы должны быть собраны с сайта инфекции бактериальной или грибковой культурой. При подозрении на вторичную инфекцию легких, мокрота кашлянул от глубокогов легких, трахеи аспираты, бронхоальвеолярного лаважа жидкости, и образцы кисти должны быть собраны для культуры. Своевременная культура крови должна быть выполнена у пациентов с высокой температурой. Посев крови, взятые из периферической венозной или катетеры должны быть выполнены у пациентов с подозрением на сепсис, который имел постоянный катетер. Рекомендуется, чтобы они берут кровь G и испытание GM по крайней мере два раза в неделю в дополнение к грибковой культуры.

0 Лаборатория безопасности

защитные меры биологической безопасности должны быть определены на основе различных уровней риски экспериментального процесса. Средства индивидуальной защиты должны быть приняты в соответствии с требованиями BSL-3 лаборатории защиты для сбора дыхательных путей образца обнаружения нуклеиновых кислот и операций вирусных культур. Средства индивидуальной защиты в соответствии с требованиями BSL-2 лаборатория защиты должна проводиться для биохимических, иммунологических тестов и других рутинных лабораторных тестов. Образцы должны транспортироваться в специальных транспортных цистернах и ящиках, что требования отвечают биобезопасность. Все лабораторные отходы должны быть строго автоклавированы.