2020-07-12
184
Для определения концентрации спермиев в чистый флакон наливают 10 мл профильтрованного 3,5% раствора лимонно-кислого натрия и микропипеткой вносят точно 0,1 мл спермы, не допуская попадания пены. Перед внесением пробы спермы в раствор лимонно-скислого натрия микропипетку вытирают снаружи чистой марлевой салфеткой для удаления излишка спермы. Суспензию спермы тщательно, но осторожно, перемешивают.
Пробу разбавленной спермы из флакона наливают в кюветку с рабочей длиной 10 мм и быстро определяют оптическую плотность, используя красный светофильтр прибора.
Для определения оптической плотности суспензии спермы в левый кюветодержатель, на пути прохождения пучка света, ставят кюветку, наполненную 3,5% раствором лимонно-кислого натрия, а в правый кюветодержатель -две такие же кюветы: одну с разбавленной спермой, другую с 3,5% раствором лимонно-кислого натрия. Определение проводят с использованием красного фильтра № 4. Шкалу отсчета оптической плотности левого барабана ставят на нуль, затем регулятором 1 и 2 (грубой и точной настойки) переводят стрелку гальванометра на нуль.
Вращением ручки в правом кюветодержателе меняют местами кюветы так, чтобы на пути прохождения пучка света стала кювета с 3,5% раствором лимоннокислого натрия. Поворачивая левый барабан, отклонившуюся стрелку гальванометра вновь ставят на нуль, и на красной шкале барабана читают показатель оптической плотности, а по калибровочной кривой находят концентрацию спермиев.
За конечный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов 2 параллельных определений; расхождения между ними не должны превышать 10%.
При всех способах хранения в дозе разбавленной спермы для осеменения коров и телок должно быть не менее 15 млн. спермиев с прямолинейно поступательным движением.
Определение рН спермы
Исследование проводят каждой пробы свежеполученной спермы. Концентрация водородных ионов (рН) определяется калориметрическим или электрометрическим методом. Колориметрические методы базируются на изменении цвета некоторых индикаторов при изменении кислотности среды. Впроизводственных условиях рНспермы можно определить при помощи прибора потенциометра ЛПУ-01 или электрометрически универсального индикатора (бумага или бромтимол). 144
Для определения рНспермы при помощи универсальной индикаторной бумаги полоску ее смачивают исследуемой спермой (пользуясь стеклянной палочкой или пипеткой) и немедленно сравнивают цвет со шкалой, приложенной к пачке индикаторной бумаги.
Сперма быка и барана должна иметь рН7,2-7,6. Если происходит сдвиг реакций спермы в щелочную сторону (рН7,1 и выше), это указывает на плохое качество ее в меньшую жизнеспособность спермиев. Если рНспермы ниже 6,5, то это свидетельствует о значительном накоплении в ней молочной кислоты.
Сдвиг рНспермы хряка и жеребца до 6,9-7,0 указывает на хорошее качество спермы. Отклонение рНдо 7,8-8,0 является показателем низкой жизнеспособности спермиев.
Определение процента живых и мертвых спермиев
Процент живых спермиев можно точно определить, пользуясь окраской их по В.А. Морозову.
Установлено, что оболочка спермиев, у которых энергично протекают обменные процессы, не пропускают в протоплазму некоторые лабораторные краски. Поэтому живые, подвижные спермии не окрашиваются, тогда как мертвые легко пропускают краску внутрь и полностью окрашиваются.
Для определения процента живых спермиев наносят каплю спермы на край теплого предметного стекла, хорошо вымытого и обезжиренного, и добавляют к ней 2-3 капли 5% водного раствора эозина. Быстро перемешивают сперму с краской стеклянной палочкой и делают ровный тонкий мазок при помощи покровного шлифованного стекла. Он должен быстро высохнуть на воздухе. Всю операцию следует делать быстро, чтобы живые спермин не погибли прежде, чем высохнет мазок, и не окрасились.
Высушенный мазок просматривают под микроскопом при увеличении в 300 раз, подсчитывая живых и мертвых спермиев. Спермии, бывшие живыми в момент окраски, выделяются на розовом фоне мазка своей белой неокрашенной головкой. Мертвые окрашены в розовый цвет. Подсчитывают подряд 500 спермиев, отмечая при этом число окрашенных, и отсюда вычисляют процент мертвых и живых спермиев. Подсчет удобно вести, пользуясь клавишным лейкоцитарным счетчиком. Вычисление ведут по формуле:
где П-процент живых спермиев;
Ж -количество сосчитанных в мазке живых (неокрашенных) спермиев. 145
Изучениевлияния наспермии
фактороввнешнейсреды
Влияние на спермии различной температуры
Раздавленные капли спермы просматривают под микроскопом и определяют на электрообогревательном столике, при температуре +50°-55°С. При рассматривании капли спермы вначале замечается усилие активности спермиев, а затем наступает их гибель. Предметное стекло с другой раздавленной каплей помещают на 1-2 минуты на лед и, протерев нижнюю часть стекла фильтровальной бумагой, переносят его на столик микроскопа, а затем кладут на электрообогревательный столик (t= +40°С). Впервом случае все спермии будут неподвижны, а при повышении температуры часть спермиев восстанавливает подвижность, остальные -мертвые.
Влияние на спермиев различного осмотического давления
Готовят несколько раздавленных капель спермы, определяют активность спермиев, а затем под покровное стекло вносят каплю 3% раствора хлористого натрия или дистиллированной воды, и сперму вновь просматривают под микроскопом. Под влиянием 3% гипертонического раствора хлористого натрия спермии погибают через 1-2 минуты вследствие обезвоживания; при рассмотрении капли под большим увеличением можно увидеть измененные спермии (сморщенные, уменьшенные в размере).
При внесении в сперму дистиллированной воды происходит быстрая гибель спермиев вследствие дегидратации; они имеют закрученные хвосты.
