Золотым стандартом должна была стать изоляция ВИЧ

3. Хотя неизвестно, как он и его коллеги первоначально определили
изоляцию, определение не включало реакцию антитело / антиген (
вестерн-блоттинг). Это означает, что Галло и его коллеги знали, что
реакцию антитело / антиген нельзя использовать в качестве доказательства изоляции. Тем не менее, к тому
времени, когда их научные статьи были опубликованы, и чтобы согласовать
низкую корреляцию между тем, что они изначально называли изоляцией, и
реакцией антитело / антиген, произвольно и вопреки всем научным
рассуждениям, они «добавили вестерн-блоттинг» к своему определению. из
изоляции. (Интересно, что даже с их новым определением
корреляция между "изоляцией" и тестами на антитела все еще была
не идеальной. Они «изолировали» ВИЧ от 26/72 (36%) пациентов
со СПИДом, в то время как 88% пациентов со СПИДом были серопозитивными, используя
тест на антитела, который Галло считал высокоспецифичным).

В интервью, которое Монтанье дал французскому журналисту Джамелю Тахи в
1997 году, он заявил: «Анализ белков вируса требует массового
производства и очистки. Это необходимо сделать». Действительно, единственный
способ доказать, что белок является вирусной составляющей, - это получить его из материала,
который не содержит ничего, кроме вирусных частиц. Вместо этого группы Монтанье и
Галло инкубировали белки с концентрацией 1,16 г / мл с сыворотками
больных СПИДом. Было установлено, что белки, которые чаще реагируют с сывороткой,
являются белками ВИЧ (хотя ни одна из групп не опубликовала никаких доказательств
существования ретровирусоподобных частиц, чистых или нечистых, с концентрацией 1,16 г / мл.
группа); и антитела к ВИЧ. Однако даже если
реакция антиген / антитело на 100% специфична, то есть антитела реагируют только с
индуцирующими антигенами и ни с какими другими, по такой реакции невозможно
определить происхождение даже одного реагента, не говоря уже о происхождении обоих
антиген и антитело. Рассмотрим разные сценарии:

1. И у Галло, и у Монтанье были доказательства того, что полоса 1,16 г / мл
не содержала ничего, кроме частиц ретровируса, и что их антитела
специфически реагировали с их белками. По словам Монтанье, в культурах,
которые содержат клетки, происходящие от пациентов с лейкемией взрослых клеток T4,
как это сделала линия клеток Gallo HUT-78, «это настоящий суп»
ретровирусов. В самом деле, даже если культуры не содержат ВИЧ, они будут
содержать HTLV-I, и, учитывая условия, использованные Галло, и тот факт, что
клетки были лейкемическими, они также могут содержать эндогенные ретровирусы.
По словам одного известного эксперта по ВИЧ Майрона Эссекса, 35% больных СПИДом
обладают антителами к HTLV-I. (В том же номере журналаScience, в которой
Монтанье опубликовал свое выделение «ВИЧ», Галло опубликовал три
статьи, в которых утверждалось, что HTLV-I изолирован от пациентов со СПИДом, предполагая, что этот
ретровирус был причиной СПИДа. По словам другого не менее
известного эксперта по ВИЧ, Райнхарда Курта из Института Пауля-Эриха в Германии, у
70% «ВИЧ-положительных пациентов» есть антитела, которые реагируют с
ретровирусом HTDV / HERV-K, эндогенным ретровирусом или как выразился Курт,
ретровирус присутствует «во всех нас». Тридцать семь процентов ВИЧ-
позитивных людей также имеют антитела к
ретровирусам типа D, тогда как ВИЧ считается лентивирусом. Хотя
Культуры Монтанье, возможно, не содержали HTLV-I, результат мог все
еще быть «настоящим супом» из эндогенных ретровирусов, особенно если
учесть условия их культивирования и используемые клетки,
лимфоциты пуповины, которые, как было показано, выделяют частицы, подобные ретровирусу. даже
если не инфицирован ВИЧ. Поскольку мы не можем получить белки из каждой
частицы и охарактеризовать их, следующий лучший способ -
это определить массу частиц, разрушить их белки и расположить их на электрофоретической
полоске в соответствии с их молекулярной массой. Хотя мы знаем, что
белки в полоске являются ретровирусными, у нас нет способа определить, какие
белок принадлежит к какому ретровирусу, если более одного ретровируса присутствует
в полосе 1,16 г / мл. Когда белки инкубируются с сывороткой, мы можем
обнаружить, что некоторые из белков вступают в реакцию. По такой реакции мы сможем сказать,
что антитела и, очевидно, белки являются вирусными, но мы не можем
определить, какой белок принадлежит какому вирусу и каким вирусом
были индуцированы антитела. Мы определенно ошибемся, если сочтем такую
реакцию доказательством того, что полоса 1,16 г / мл: (а) содержит только один ретровирус;
(б) ретровирус представляет собой новый экзогенный ретровирус ВИЧ; (c) белки являются
белками ВИЧ; (d) антитела представляют собой антитела к ВИЧ; (e) эти данные
доказательство того, что пациент инфицирован ВИЧ, даже если
реакция антител и антигенов носит специфический характер.

2. И Монтанье, и Галло доказали, что подавляющее большинство
полосы 1,16 г / мл состоит из частиц ретровируса, но что полоса также
содержит неретровирусный материал. Этот материал мог иметь клеточное
происхождение (клеточные составляющие также составляют 1,16 г / мл) и может иметь
бактериальное, грибковое и вирусное происхождение (составляющие многих инфекционных
агентов, кроме ретровирусов, которые, как известно, присутствуют в культурах и у
пациентов.). Это факт, что в США, Европе и Австралии люди
со СПИДом, а также лица из группы риска имеют антитела ко многим инфекционным агентам,
включая вирусы, такие как EBV, CMV и вирус гепатита B. Доказательства также
Существуют данные, свидетельствующие о том, что у людей со СПИДом и лиц, находящихся в группе риска, имеются
сердечно-сосудистые иммунные комплексы, ревматоидный фактор, антиядерные,
антиклеточные, антитромбоцитарные, антиэритроцитарные, антиактиновые, анти-тубулиновые и
антимиозиновые антитела. Сам Монтанье продемонстрировал, что люди
со СПИДом и люди из группы риска имеют высокие уровни антител к вездесущему
клеточному белку актину с молекулярной массой 41000, а также к
другому вездесущему белку, миозину, который имеет две субъединицы молекулярного
веса, 18000 и 25000. Антитела против лимфоцитов были обнаружены у
87% пациентов с положительным тестом на антитела к ВИЧ и их
уровни коррелируют с клиническим статусом. Также признано, что африканцы, больные
СПИДом, и те, кто находится в группе риска, инфицированы многими другими возбудителями, кроме ВИЧ.

Мы знаем, что невозможно выделить белок из массы 1,16 г / мл,
и знаем, из какого компонента он происходит. Давайте тогда проделаем те же шаги,
что и Галло и Монтанье. Возьмите массу материала полосы 1,16 г / мл,
разрушьте белки и электрофоретически расположите белки в полосе в
соответствии с их молекулярной массой. Используя этот метод, мы не можем сказать,
из какого компонента массы полосы 1,16 г / мл происходит белок на полосе
. Затем мы инкубируем белки в полоске с сыворотками пациентов и
обнаруживаем, что некоторые из белков реагируют с антителами, присутствующими в сыворотках.
Даже если взаимодействие антитело / антиген на 100% специфично, такая реакция
позволяют нам определить происхождение белков. Тем не менее, исходя из такой реакции и
без каких-либо доказательств специфической реакции антител, Монтанье и Галло
определили происхождение как белков, так и антител как «ВИЧ».

Как уже упоминалось, Монтанье обнаружил три белка в полосе 1,16 г / мл, которые
реагировали с антителами, присутствующими в сыворотке крови его пациентов. Это были p25, p80 и
p45. Монтанье пришел к выводу, что его пациенты были инфицированы ретровирусом,
который «содержит основной белок p25, аналогичный по размеру с HTLV-I»,
но не сделал никаких комментариев относительно белка p80. Относительно p45 он написал:
«Белок 45K [p45] может быть результатом заражения вируса клеточным
актином».

В 1997 году Монтанье сказал, что белок, который он обнаружил в 1983 году, имел молекулярную
массу 43000 и был актином. (Молекулярная масса актина не равна ни 45000,
ни 43000, а 41000. Однако, поскольку Монтанье и Галло определили
молекулярные массы белков по их миграции в электрофоретической
полоске, и поскольку на миграцию могут влиять другие факторы,
например, заряда белка, возможно, что эти небольшие различия
в молекулярной массе являются просто результатом экспериментальных изменений).

Когда Галло и его коллеги использовали клеточные белки в качестве антигенов в
WB, они сообщили: «Наиболее заметными реакциями были антигены со
следующими молекулярными массами: 65 000, 60 000, 55 000, 41 000 и 24 000. Антигены
с молекулярными массами приблизительно 88 000, 80 000, 39 000, 32 000, 28 000
и 21 000 дали менее заметные реакции... Также были обнаружены большой белок с молекулярной
массой приблизительно 130 000 и белок 48 000
". В другом эксперименте «антигены вируса, очищенные
из культуральной жидкости», то есть полоса 1,16 г / мл, инкубировали с
различными сыворотками. Они обнаружили «обширную» реакцию
сывороток больных СПИДом на p24 и p41 и пришли к выводу: «
основной компонент вирусного препарата. Таким образом, P24 и p41 могут
рассматриваться как структурные белки вируса... Более того,
в препарате вируса был обнаружен антиген с молекулярной массой приблизительно 110 000, но его
уровень в клетках был ниже предела обнаружения. Кроме того, в
препарате вируса присутствовал р39 … Иногда
сыворотка распознавала дополнительный набор антигенов, но их связь с описанными выше антигенами неясна».

Между 1983-87 гг. Обнаружение антител в сыворотке пациентов, которые реагировали
с p24 или p41 (Монтанье считал реакцию с p24 и Gallo с p41 ВИЧ-
специфической), считалось доказательством того, что пациент был инфицирован ВИЧ. В то
же время стало очевидно, что у значительного числа людей,
не подверженных риску СПИДа, есть антитела, которые реагируют с этими белками. С 1987 года
большинство белков, которые, как обнаружил Галло, вступали в реакцию либо в клеточных экстрактах, либо
в полосе 1,16 г / мл, теперь считаются белками ВИЧ, и лабораториям требуется
присутствие антител, которые реагируют более чем с одним белком, прежде чем пациент
будет считаться инфицированным ВИЧ., Количество и идентичность антитела / белка
Требуемые полосы (вестерн-блоттинг) варьируются от континента к континенту, от страны к
стране и даже между лабораториями одной страны и внутри них. Таким образом, один и
тот же пациент может быть серопозитивным на ВИЧ, например, в Нью-Йорке,
но не в Африке или Австралии.

Кроме того, в течение многих лет существуют доказательства, которые показывают, что p24 не является
«ВИЧ» специфичным ^123,124, p41 является клеточным белком актином, ^58,125,126
p32 является гистосовместимым DR-белком ^126,127 класса II и p120 / p160
являются олигомерами p41. ¹²⁸

Даже если существует доказательство того, что белки «ВИЧ» действительно принадлежат
уникальному экзогенному ретровирусу, нельзя предполагать, что антитела, которые реагируют
с ними, являются диагностическими для «ВИЧ-инфекции». Для подтверждения специфичности
тестов на антитела необходимо:

a. протестировать большое количество субъектов со СПИДом и без него. Субъекты
без СПИДа не должны быть исключительно здоровыми людьми (поскольку у них нет
высоких уровней антител, можно было бы ожидать немногочисленных реакций, если они вообще были бы), но
включать больных, таких как пациенты с инфекционными заболеваниями (кроме
тех, которые, как считается, являются результатом ВИЧ-инфекция), получающие
химиотерапию и пациенты с аутоиммунными расстройствами;

b. одновременно (желательно на одной и той же пробе крови) провести тесты на
изоляцию ВИЧ;

c. сравнить результаты теста на антитела с результатами выделения ВИЧ, то
есть использовать ВИЧ в качестве золотого стандарта для теста на антитела.

На сегодняшний день никто не опубликовал такие исследования, в которых использовалось бы какое-либо определение
«изоляции ВИЧ».

Неизбежный вывод состоит в том, что реакция антитело / антиген не является ВИЧ-
специфической и, следовательно, не может быть использована для доказательства выделения ВИЧ, независимо от того, как
определяется изоляция.