Обратная транскриптаза

В настоящее время некоторые ведущие исследователи ВИЧ считают ОТ как
" непременное условие " ретровирусов и рассматривают обнаружение
обратной транскрипции в культурах лимфоцитов от больных СПИДом не только как
доказательство наличия таких вирусов, но и как доказательство самого ВИЧ, включая выделение ВИЧ.
и количественная оценка. Однако, по словам некоторых из самых известных
ретровирологов, включая его первооткрывателя, а также лауреата Нобелевской премии и
бывшего директора Национального института здоровья США Гарольда Вармуса, обратные
транскриптазы присутствуют во всех клетках, а также в бактериях и вирусах.
«Обратная транскриптаза (ОТ) была впервые обнаружена как важный катализатор
в биологическом круговороте ретровирусов. Однако в последние годы
накопились данные, показывающие, что ОТ участвуют в удивительно большом количестве
РНК-опосредованных транскрипционных событий, которые включают как вирусные, так и невирусные генетические
объекты ". Даже если ОТ была свойством только вирусов, она не специфична для
ретровирусы. Согласно Вармусу, «обратной транскрипции отводилась
центральная роль в репликации других вирусов [вирусов гепатита В и
мозаики цветной капусты ], а также в транспозиции и генерации других видов
эукариотической ДНК». «Вирусы гепатита В (HBV) представляют собой небольшие ДНК-вирусы,
которые вызывают стойкие инфекции печени у различных животных-хозяев и
реплицируют свои ДНК-геномы посредством обратной транскрипции промежуточного соединения РНК.
Все члены этого семейства содержат открытую рамку считывания (ORF), «P»
(для pol), которая гомологична ретровирусным генам pol «[ pol = полимераза]».
Вирус гепатита B (HBV) напоминает ретровирусы, включая ВИЧ, в в нескольких
отношениях. В частности, оба вируса содержат обратную транскриптазу и
реплицируются через промежуточную РНК». В связи с этим было
высказано предположение, что инфекцию гепатита В следует лечить теми же
антиретровирусными агентами, что и инфекцию ВИЧ.

В настоящее время существуют данные, свидетельствующие о том, что, хотя основным органом-мишенью
вируса гепатита B является печень, клетки, отличные от гепатоцитов, «включая
лимфоциты и моноциты периферической крови, могут инфицироваться HBV».
Стимуляция лимфоцитов в целом и PHA (агент, используемый в большинстве
культур с тканями пациентов со СПИДом) связаны с продуцированием
вируса гепатита B из лимфоцитов периферической крови у пациентов, инфицированных
HBV, включая «репликацию вируса при хронической инфекции гепатита B.
детство". Инфекция вирусом гепатита B широко распространена в
группах риска СПИДа.

В начале 1970-х годов Галло доказал, что культуры лейкемических клеток транскрибируют
матрицу -праймер An.dT _15, как и материал, образующий полосу 1,16 г / мл,
происходящий из «стимулированных ФГА (но не нестимулированных нормальных
лимфоцитов крови человека»). Чтение научных статей Галло 1984
создается впечатление, что лейкемическая клеточная линия HT и, следовательно, ее клоны, включая H9,
которые использовал Галло, были новой клеточной линией, разработанной в лаборатории Галло. Однако
теперь известно, что клеточная линия HT является клеточной линией HUT78, которая произошла
от пациент с Т-клеточным лейкозом взрослых, заболеванием, которое, как утверждает Галло,
вызвано ретровирусом HTLV-I. Годом ранее Галло утверждал, что
что клетки HUT78 инфицированы HTLV-I. Если это так,
группа Галло обнаружила бы ОТ в своих культурах, даже если фермент специфичен для
ретровирусов и культуры не были инфицированы ВИЧ. Другие исследователи
сообщили об активности ОТ в нормальных неинфицированных сперматозоидах.

Следует также отметить, что присутствие обратной транскриптазы ВИЧ
было обнаружено как Монтанье, так и Галло (и всеми экспертами по ВИЧ с тех пор)
косвенно, то есть путем обнаружения транскрипции матрицы-праймера An.dT ₁₅.
Однако, по крайней мере, в 1984, если не в 1983 году, Монтанье и его коллеги знали, что
в 1970-х годах было доказательство того, что «Среди ряда матричных праймеров (rA) _n. (DT) _12-18
наиболее часто использовался, поскольку RT показывает высокая активность этого
матричного праймера. Однако проблема в том, что клеточные ДНК-полимеразы (pol b
и pol g) также эффективно используют те же
матричный праймер». Фактически, в 1975 году Международная конференция по
эукариотическим ДНК-полимеразам определила ДНК-полимеразу γ как клеточный фермент,
который«копирует An.dT ₁₅
с высокой эффективностью, но плохо копирует ДНК». Годом ранее Галло
писал:«В соответствующих условиях реакции ДНК-полимераза β может
эффективно транскрибировать поли (A), примированный олиго (dT)». Таким образом, можно
обнаружить транскрипцию An.dT ₁₅ даже при отсутствии ОТ, вирусной или
клеточной, особенно под условия, используемые для доказательства
существования ВИЧ (и Монтанье, и Галло признают, что явления, обнаруженные
в культурах, которые, как считается, доказывают изоляцию ВИЧ, не могут быть обнаружены, если только
клетки химически стимулированы). Сегодня неспецифичность RT
транслируется даже в популярной прессе для читателей, рассматривающих возможность покупки
акций биотехнологических компаний.

В заключение, даже если принять
определение изоляции, данное группами Монтанье и Галло, учитывая, что RT и обратная транскрипция
неспецифичны для ретровирусов, их обнаружение даже в неограниченном количестве
последовательных культур / совместных культур не может считаться доказательством изоляции и
размножения ретровирус.

"ВИЧ" частицы

Монтанье и его коллеги сообщили о ВИЧ сначала как частицу типа C,
затем как частицу типа D, а затем как лентивирус. В 1984 году Галло и его
коллеги сообщили о ВИЧ как о частице типа C. Однако в 1985 году Галло писал:
«Возможной уникальной особенностью вирионов является цилиндрическое ядро, наблюдаемое
у многих предположительно зрелых вирионов. Вирионы, имеющие этот тип ядра,
часто отмечались для определенных ретровирусов типа D, а в некоторых случаях - для
типа C. ретровирусы». Джей Леви сообщил, что ВИЧ - это частица типа D. Другие сотрудники
Калифорнийского университета писали, что «изолированный вирус СПИДа демонстрирует
морфологические характеристики типа C, типа D и лентивирусов». Согласно
Энтони Фаучи и другим "" Т-клетки и макрофаги по-
разному справляются с вирусом. В Т-клетке вирусные почки выходят из внешней плазматической мембраны
клетки. В культурах моноцитов / макрофагов он прорастает в мембраносвязанные
везикулы внутри клеток». Последнее является описанием
ретровирусной частицы типа А. Таким образом, ведущие эксперты по ВИЧ описали ВИЧ как члена
двух подсемейств и трех родов Retroviridae.. Эти таксономические
различия подразумевают, что если бы ВИЧ был недавно обнаруженным млекопитающим, то это мог бы быть
человек, горилла или орангутанг. В настоящее время по общему мнению, ВИЧ
рассматривается как лентивирус. Это соглашение было достигнуто, когда оно было реализовано
что у «ВИЧ-инфицированных» людей СПИД не проявился вскоре после
«заражения», хотя обозначение лентивируса является
морфологическим описанием.

«ВИЧ-инфицированные культуры» содержат помимо частиц с
морфологией, приписываемой ВИЧ, многие другие «вирусные частицы». К
примеру: Hockley и его коллеги из электронной микроскопии и фототехника
секции и отделения вирусологии Национального института биологических
стандартов и контроля в Соединенном Королевстве описывают изобилие частиц,
которые они разделяют примерно на три группы, зрелые, кольцеобразные и маленькие с
шипами. Зрелые частицы «имели приблизительно сферическую форму и
диаметр от 100 до 150 нм. Внешняя липидная мембрана часто была сломана или
местами отсутствовала, и не было никаких признаков поверхностных выступов... Несколько зрелых частиц
были обнаружено, что было больше, чем в среднем, и, похоже, содержит двойную
нуклеоиде... в подготовке ВИЧ там всегда было много везикулы с
зернистым содержимым, в которых не была возможностью признать особый нуклеоид «
Кроме того,» Кольцо типа частицы имели более стабильную сферическую форму и
были больше (140 нм в диаметре), «а маленькие частицы«были
необычно сферическими, но иногда слегка угловатыми по форме и
диаметром от 65 до 90 нм»и имели шиповидные выступы на своей поверхности. Hans Gelderblom
who провел большинство электромагнитных исследований в области ВИЧ / СПИДа и сообщил, что хотя лентивирусы
и, следовательно, ВИЧ, как считается, имеют ядро ​​конической формы, он и его коллеги
обнаружены также центросимметричные и трубчатые ядра. Подпись к одной фотографии
гласит: «Можно увидеть
вирионы, имеющие либо удлиненные, похожие на дубинки» трубчатые ядра диаметром 30-35 нм, либо содержащие более одного ядра. Трубчатые и правильные
конические ядра могут сосуществовать в одном вирионе». В тексте говорится:
«Редко
наблюдаются трубчатые стержневые структуры, напоминающие дубинки, диаметром 30-35 нм и длиной 150-250 нм». Лекацас и другие
вирусологи из Претории и Йоханнесбурга сообщили: "

функции. Мы обнаружили два основных размера вирусных частиц, 90 нм и 120 нм, которые
присутствуют в большом количестве. Более крупная частица не имеет выступов на поверхности, в то время
как меньшая частица редко бывает «голой» и обычно имеет выступы». Центр
контроля заболеваний США сообщил: частицы ВИЧ«обычно круглые и имеют диаметр
около 85-95 нм... Вирус с стержневой формой. нуклеоиды и частицы с слезинка
формы обычно видели в HTLV-III / LAV инфицированные лимфоциты, иногда
кольцеобразные частицы без плотных нуклеоидов также видны». вопрос
тогда возникает, если частицы с„уникальной“морфологии считается
, что ВИЧ представляет собой экзогенный ретровирус, происходящий из тканей СПИДа
пациенты или группы риска, тогда каково происхождение и роль многих
частиц, не связанных с ВИЧ, и какие, если таковые имеются, частицы «ВИЧ» или не-ВИЧ имеют полосу
1,16 г / мл? То есть какие имеют плотность, характерную для ретровирусов?
Ретровирусоподобные частицы были обнаружены в
культурах клеток лимфоцитов пуповинной крови, не инфицированных ВИЧ, и в клетках, используемых для «выделения» ВИЧ, таких
как В-клетки, трансформированные H9 (HUT-78), CEM, C8166 и EBV. Ретровирусоподобные
частицы, антигенно связанные с ВИЧ, были обнаружены в культурах
экстрактов слюнных желез пациентов с синдромом Сьоргена. В единственном исследовании EM,
либо в естественных условиях или в пробирке, в которой были использованы подходящие средства управления
и в ходе которого было проведено всестороннее слепое исследование контролей и тестового материала
, частицы, неотличимые от «ВИЧ», были обнаружены в 18/20
(90%) больных СПИДом, а также в 13/15 (87%) лимфатических узлов, не связанных со СПИДом.
утолщения. Это привело авторов к выводу: «Наличие таких
частиц само по себе не указывает на инфицирование ВИЧ».

Крайне важно отметить, что:

1. Как указали в 1998 году Ханс Гельдерблом и его коллеги, на сегодняшний день никто
не сообщил о наличии «инфекционного ВИЧ в плазме».

2. Ни в одной «ВИЧ-инфицированной» культуре нет частиц, которые проявляют
как основные морфологические характеристики ретровирусов, то есть
«диаметр 100–120 нм», так и поверхности, которые «усеяны
выступами (шипами, выступами)». Специалист по электронному микроскопу согласен с тем, что
частицы «ВИЧ» лишены выступов и, следовательно,
белка «ВИЧ» gp120 (см. Ниже), который, как утверждается, является составным белком
выступов.

Ганс Гелдерблом и его коллеги подсчитали, что сразу после
выхода из клеточной мембраны «частицы ВИЧ» обладают в
среднем 0,5 выступов на частицу, которые быстро теряются, но также отметили,
что «возможно, что структуры, напоминающие выступы, могут наблюдаться
даже когда не было gp120 [knobs], т.е. ложных срабатываний ". ^{Тем не менее,
все эксперты по ВИЧ соглашаются, что инфекционность частиц ВИЧ определяется
gp120 (ручки). Таким образом, согласно Монтанье} и др.^{, «Gp120
отвечает за связывание рецептора CD4», в то время как для Мэтьюса и
Болоньези: «Сначала gp120 связывается с рецептором CD4 на неинфицированной клетке;
затем gp41 закрепляется в прилегающей мембране; затем две мембраны
начинают сливаться, и вирус изливает свое содержимое в клетку». Каллебаут} и
др. ^{заявляют:«Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) инфицирует лимфоциты,
моноциты и макрофаги, связываясь со своим основным рецептором,
молекулой CD4, через гликопротеин gp120 вирусной оболочки. Петля V3 gp120 имеет
решающее значение для ВИЧ-инфекции». Другие полностью согласны.}

Общее согласие с тем, что gp120 (выступы) абсолютно необходим для того,
чтобы частицы ВИЧ были заразными, и тот факт, что этот белок (выступы) не присутствует
в бесклеточных частицах, приводит к одному неизбежному выводу, а именно:
частицы «ВИЧ» не являются заразны, они не являются вирусными частицами.
Более того,

1. Для заражения лимфоцитов пуповины и клеток HUT-78 Монтанье и
Галло использовали бесклеточные жидкости (супернатанты). Монтанье культивировал
лимфоциты пуповины с супернатантом от совместных культур лимфоцитов
BRU, культивированных с лимфоцитами здорового человека. Галло культивировал
клеточную линию HUT-78 с супернатантами культур десяти
«инфицированных» индивидуумов. Даже если бы супернатанты содержали
частицы, будучи бесклеточными, частицы были бы лишены выступов (gp120),
то есть не были бы заразными. Это означает, что даже если
Монтанье и Галло имели доказательства того, что их пуповина и HUT-78 клонированы
культуры содержали частицы со всеми морфологическими характеристиками
ретровирусов: в градиентах плотности сахарозы частицы имели полосу
1,16 г / мл, и эта полоса не содержала ничего, кроме частиц,
частицы не могли происходить от их пациентов. Более того, поскольку
единственные образцы, которые Институт Пастера передал лаборатории Галло,
были бесклеточными, следует подвергнуть сомнению основания, на которых Галло был обвинен в
незаконном присвоении французского вируса.

2. Принято считать, что больные гемофилией инфицированы ВИЧ
зараженным фактором VIII. Однако до сих пор никто не сообщил о наличии
частиц «ВИЧ» в плазме. Даже если бы такие частицы присутствовали,
частицы были бы лишены gp120. Поскольку gp120 «имеет решающее значение для
способности ВИЧ инфицировать новые клетки», больные гемофилией не
могут быть инфицированы ВИЧ при введении фактора VIII. Есть еще одна
фундаментальная причина, по которой больным гемофилией невозможно заразиться
«ВИЧ» от «зараженного» фактора VIII. Согласно
публикации CDC, ¹¹² «Для получения данных по
для выживаемости ВИЧ, лабораторные исследования потребовали использования
искусственно высоких концентраций вируса, выращенного в лаборатории... количество исследованного
вируса не обнаружено в образцах человека или любом другом месте в
природе... он не распространяется и не поддерживает инфекционность вне своего хозяина.
Хотя эти неестественные концентрации ВИЧ можно поддерживать в
строго контролируемых и ограниченных лабораторных условиях, исследования CDC
показали, что высушивание даже таких высоких концентраций ВИЧ снижает
количество инфекционных вирусов на 90-99 процентов в течение нескольких часов. Поскольку
концентрации ВИЧ, используемые в лабораторных исследованиях, намного выше, чем
фактически обнаруженный в крови или других образцах тела, высушивание ВИЧ-инфицированной
человеческой крови или других биологических жидкостей снижает теоретический риск
передачи из окружающей среды до наблюдаемого - практически
нулевого». Учитывая, что фактор VIII отпускается в виде лиофилизированной порошка,
который требует много недель или месяцев ожидания использования, непонятно, что
CDC и другие продолжают рассматривать пациентов с гемофилией с риском
заражения ВИЧ через зараженные концентраты фактора VIII, и загадочно, что
другого объяснения "ВИЧ" и СПИДа у больных гемофилией не
было искал. ⁴

Единственный вывод, который можно сделать из данных электронной микроскопии, заключается в том,
что указанные частицы не являются ВИЧ или даже ретровирусными, что означает, что
обнаружение таких частиц, будь то в неограниченном количестве последовательных
культур / совместных культур, не является доказательством выделения., независимо от того, как
определяется изоляция.

Более того:

1. Даже если активность обратной транскриптазы и ретровирусоподобные частицы
специфичны для ретровирусов, они не специфичны для уникального ретровируса.
Единственным свидетельством, обе группы представлены для существования уникального
ретровируса, ВИЧ, является / антитело антиген, как это было признано как
Монтанье и Галло.

2. Принято считать, что обнаружение ретровируса в культуре, особенно
в условиях, используемых Монтанье и Галло, не является доказательством того, что
ретровирус присутствует in vivo. Единственным доказательством
существования ВИЧ in vivo, которое представили группы Галло и Монтанье, была
реакция антиген / антитело.

3. Даже сегодня единственным доказательством того, что ВИЧ является причиной СПИДа,
является «корреляция» между тестом на антитела и появлением
СПИДа.

Очевидно, что:

a. интерпретация Монтанье и Галло реакции антиген / антитело
имеет решающее значение для гипотезы ВИЧ о СПИДе и, фактически, для существования
уникального ретровируса, ВИЧ;

b. если интерпретации неверны, у человека не будет другого выбора, кроме как
подвергнуть сомнению не только гипотезу ВИЧ о СПИДе, но и существование ВИЧ.

"ВИЧ" антитела

Уже упоминалось, что простое взаимодействие между антигеном,
таким как белок или вирус, и антителом не доказывает ничего, кроме
химической связи. Во всех других аспектах реакция может быть совершенно
неспецифической. Чтобы доказать специфичность реакции, необходимо использовать
альтернативный, независимый метод доказательства существования антигена, то
есть использовать то, что обычно называют золотым стандартом. Единственный возможный
золотой стандарт для тестов на антитела к ВИЧ (реакция антиген / антитело) - это
сам ВИЧ, то есть выделение ВИЧ. Независимо от того, как определяют изоляцию, очевидно,
что определение не может включать реакцию антитело / антиген (тест на антитела,
ни WB, ни ELISA), потому что при этом не только не
проводится независимый анализ, но и тест становится его собственным золотым стандартом и, таким образом, становится
бессмысленным. Читая статьи Gallo Science за 1984 год, можно сделать вывод,
что Галло всегда определял изоляцию как «более чем одно из следующего:
активность обратной транскриптазы либо в супернатанте, либо в полосе 1,16 г / мл;
ретровирусоподобные частицы в культуре или реакция между белками (либо в
культивируемых клетках или полосе 1,16 г / мл) с антителами, присутствующими в
сыворотке пациентов или «антисыворотке к HTLV-III». Однако в интервью, которое
Галло дал Хью Кристи, редактору британского журнала Continuum,
на Женевской конференции по СПИДу 1998 года Галло сказал: «Иногда у нас были
положительные результаты вестерн- блоттинга, но мы не могли изолировать вирус. Мы забеспокоились и почувствовали, что
иногда получаем ложноположительные результаты, поэтому добавили Вестерн-блоттинг. Это все, что
я могу сказать. вы. Когда мы добавили его, это был экспериментальный инструмент, и для нас он
работал хорошо, потому что мы могли изолировать вирус, когда мы это делали». Другими
словами:

1. В 1984 году Галло знал, что для подтверждения специфичности теста на антитела
необходимо использовать золотой стандарт.