2020-09-24
140
Необходимо: испытуемый, спирт, эфир, йод, вата, скарификаторы для разового использования, микроцентрифуга, 33%-ный раствор лимоннокислого натрия, капилляр для определения гематокрита.
Учебно-исследовательская цель работы: освоить методику и определить объемное соотношение плазмы и форменных элементов в крови человека.
Ход работы
1. Промывают капилляр 33%-ным раствором лимоннокислого натрия (антикоагулянт).
2. Делают прокол кожи пальца и набирают в капилляр кровь. Для этого капилляром касаются капли крови и наклоняют его горизонтально. В силу капиллярности он заполняется кровью.
3. Помещают капилляр в держатель микроцентрифуги и закрепляют.
4. Вращают ручку микроцентрифуги со скоростью 0,5 оборота в секунду в течение 1 минуты.
5. Определяют длину прозрачного столбика плазмы в мм. Исходя из того, что общая длина капилляра составляет 50 мм, рассчитывают процентное содержание плазмы и форменных элементов в исследуемой крови. В дальнейшем рассчитывают объемное соотношение форменных элементов к объему крови или показатель гематокрита.
Нормой для взрослого человека является величина гематокрита равная 0,40–0,45 л/л, у новорожденных – 0,50–0,55 л/л, в возрасте 5 лет – 0,35–0,40 л/л.
РАБОТА № 3
Определение количества гемоглобина в крови по методу Сали
Необходимо: испытуемый, гемометр Сали, 0,1 Н раствор соляной кислоты, скарификатор, спирт, эфир, йод, вата, тазик почкообразный.
Учебно-исследовательская цель работы: овладеть методикой определения количества гемоглобина в крови.
Ход работы
1. В среднюю пробирку наливают 0,1 Н раствор соляной кислоты до нижней кровавой метки. 0,1 Н – это 0,1 нормальный раствор. Нормальность – это эквивалент вещества в литре раствора. Эквивалент – это частица, способная присоединить или отщепить Н+.
2. Специальным капилляром от гемометра Сали забирают 20 мкл крови. Обтерев кончик капилляра ватой, тотчас выдувают кровь на дно пробирки так, чтобы слой соляной кислоты остался неокрашенным. Не вынимая капилляр, ополаскивают его соляной кислотой.
3. Содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по концу пробирки, и оставляют стоять 5–10 минут. За это время в растворе происходят гемолиз и образование устойчивого соединения – солянокислого гематина.
4. Затем к раствору по капле добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет совершенно одинаков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).
5. Отмечают цифру, стоящую на уровне полученного раствора солянокислого гематина. Она покажет абсолютное содержание гемоглобина в исследуемой крови.
6. В клинической практике используется абсолютное содержание гемоглобина. Кроме этого, можно расчитать относительное содержание гемоглобина, зная, что в стандартном растворе, принятом за 100%, содержится 16,7 г % гемоглобина.
7. Сравнивают количество гемоглобина в исследуемой крови с нормой.
Нормальное содержание гемоглобина в крови взрослого человека составляет 121–138 г/л (72–80%) у женщин и 133–156 г/л (79–94%) у мужчин, у новорожденных эта величина может увеличиваться до 180–210 г/л (100–120%).
РАБОТА № 4
Виртуальный физиологический эксперимент. Определение гематокрита и содержания гемоглобина
Необходимо: персональный компьютер, программа PhysioEx 6.0 for Human Physiology (тема «Blood Analysis»), методические указания по теме «Физиология крови».
Учебно-исследовательская цель работы: выяснить, как проводятся клинические исследования крови: определение гематокрита, определение содержания гемоглобина.
Ход работы
С помощью персонального компьютера, программы PhysioEx 6.0 for Human Physiology и методических указаний по теме «Физиология крови» выполнить следующие работы:
1. Определение гематокрита.
2. Определение содержания гемоглобина.
РАБОТА № 5
Получение кристаллов гемина (Тейхмана)
Необходимо: испытуемый, микроскоп, спиртовка, стеклянная палочка, скарификатор, спирт, эфир, йод, вата, предметное стекло, покровное стекло, ледяная уксусная кислота, кристаллы поваренной соли.
Учебно-исследовательская цель работы: познакомиться с техникой приготовления кристаллов гемина.
Ход работы
1. Небольшую каплю крови помещают на предметное стекло и подсушивают ее над пламенем спиртовки при температуре не выше 50 oС.
2. Осторожно делают соскоб капли высохшей крови, добавляют в нее 1–2 кристалла поваренной соли, 1–2 капли ледяной уксусной кислоты, и всё это тщательно перемешивают.
3. Закрывают препарат покровным стеклом, медленно нагревают на спиртовке, не допуская закипания жидкости (при температуре не выше 80–90 oС).
4. После охлаждения препарат рассматривают под микроскопом сначала при малом увеличении, затем при большом. При хорошем кристаллообразовании под микроскопом видно большое количество кристаллов гемина, имеющих вид ромбовидных палочек, окрашенных в темно-коричневый цвет.
5. В отчете зарисовывают кристаллы гемина.
РАБОТА № 6
Определение осмотической стойкости (резистентности) эритроцитов
Необходимо: испытуемый, набор для взятия крови из пальца, 1%-й раствор NaCl, дистиллированная вода, 5 пробирок, штатив для пробирок, стеклограф, мерные пипетки.
Учебно-исследовательская цель работы: определить границу резистентности эритроцитов и диапазон возможности нормального существования клеток в гипотонических растворах.
Ход работы
1. Приготовить раствор NaCl различной концентрации. Для этого пронумеровать стеклографом пять пробирок. В каждую пробирку налить дистиллированную воду и 1%-й раствор NaCl в количествах, приведенных в таблице 16. Для приготовления растворов использовать мерные пипетки. Пробирки с приготовленными растворами в порядке убывания концентрации поставить в штатив. С помощью пипетки в каждую пробирку прибавить одинаковое количество крови, взятой из пальца или от животного (3–4 капли). Тщательно встряхнуть и поставить пробирки в штатив. Через 10–20 мин по цвету раствора и его прозрачности определить минимальную и максимальную стойкость эритроцитов. В пробирках, где гемолиза не произошло, раствор светлый, прозрачный, с темно-красным осадком эритроцитов. Там, где произошел частичный гемолиз, раствор розоватый, имеется темно-красный осадок эритроцитов. При полном гемолизе жидкость в пробирке становится прозрачной (лаковой).
2. Сделать вывод о причинах гемолиза в гипотонических растворах и о резерве функциональной надежности клеток крови. Заполнить таблицу разведений (табл. 16), отметить в соответствующих графах наличие гемолиза. В протокол занести таблицу разведений и результаты опыта. Работу можно проводить и с 1 мл растворов указанных концентраций.
Таблица 16
| Пробирка, № | Концентрация раствора, % | Объем вносимых ингредиентов, мл | Результат наблюдений (наличие гемолиза) | |
| 1%-й раствор NaCl | Дистиллированная вода | |||
| 1 | 0,9 | 4,5 | 0,5 | |
| 2 | 0,7 | 3,5 | 1,5 | |
| 3 | 0,5 | 2,5 | 2,5 | |
| 4 | 0,3 | 1,5 | 3,5 | |
| 5 | 0,1 | 0,5 | 4,5 | |
РАБОТА № 7
