Количественные методы

МЕТОДЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЖИВЫХ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ.

Исследование живых клеток и тканей позволяет получить информацию об их жизнедеятельности – движениях, росте, делении клеток, влиянии на них различных физических и химических факторов. Прижизненные исследования проводят либо в организме (in vivo), либо вне организма (in vitro).

Наблюдения в живом организме проводят с помощью специальных просвечивающих микроскопов – иллюминаторов (например, изучая циркуляцию крови в микрососудах), введением в организм животного витального красителя (например, троипанового синего или литиевого кармина при выявлении фагоцитов).

Более распространенными являются исследования живых клеток и тканей в культуре. Выделенные клетки, ткани или органы помещают в стеклянные или пластмассовые сосуды с питательной средой – плазму крови, искусственные среды.

Взятые из организма человека клетки при пункции или биопсии могут в культуре использоваться для определения пола, злокачественного перерождения, наследственных заболеваний.

Клеточные культуры широко применяют для гибридизации клеток.

Слиянием двух клеток различных типов образуют гетерокарион – клетка с двумя ядрами, при этом клетки обрабатывают полиэтиленгликолем или инактивированными вирусами для повреждения плазмолемм клеток. Гетерокарион способен к митозу.

Клонирование гибридных клеток приводит к образованию гибридных клеточных линий, которые используются для изучения генома. Например, в гибридной клеточной линии «мышь-человек» установлена роль хромосомы 11 в синтезе инсулина человека.

Гибридомы – клетки с геномом от двух разных клеток, одна из которых опухолевая. Например, слиянием В-лимфоцитов с опухолевыми клетками В-лимфомы. Время жизни В-лимфоцитов в культуре ограничено, а В-лимфомы «бессмертны». Гибридомы способны длительно размножаться в культуре. Каждый клон гибридомы является источником моноклональных антител.

С помощью количественно-гистохимических методов возможно изучать концентрацию и содержание химических веществ в конкретных структурах клеток и тканей.

Цитоспектрофотометрия – метод количественного изучения внутриклеточных веществ по их абсорбционным спектрам, по интенсивности поглощения света, которая зависит от концентрации вещества, производят количественное определение его в клетке.

Цитоспектрофлюориметрия – метод количественного изучения внутриклеточных веществ по спектрам их флюоресценции. Цитофлюориметры позволяют обнаружить малые количества вещества (до 10^-14 – 10^-16г) и оценивать их локализацию в микроструктурах.