Студопедия
Поделиться в соц. сетях:

рус | укр



Авто | Автоматизация | Архитектура | Астрономия | Аудит | Биология | Бухгалтерия | Военное дело | Генетика | География | Геология | Государство | Дом | Журналистика и СМИ | Изобретательство | Иностранные языки | Информатика | Искусство | История | Компьютеры | Кулинария | Культура | Лексикология | Литература | Логика | Маркетинг | Математика | Машиностроение | Медицина | Менеджмент | Металлы и Сварка | Механика | Музыка | Население | Образование | Охрана безопасности жизни | Охрана Труда | Педагогика | Политика | Право | Приборостроение | Программирование | Производство | Промышленность | Психология | Радио | Регилия | Связь | Социология | Спорт | Стандартизация | Строительство | Технологии | Торговля | Туризм | Физика | Физиология | Философия | Финансы | Химия | Хозяйство | Ценнообразование | Черчение | Экология | Эконометрика | Экономика | Электроника | Юриспунденкция

Лучшие изречения: Две самые ненавистные категории студентов: те, кто ничего не знает и знать не хочет… и те, кто все знает и хочет знать еще больше. 406 - | 284 - или читать все...

Ускоренные и экспресс-методы определения чувствительности-устойчивости микроорганизмов к антибиотикам


Дата добавления: 2014-02-13; просмотров: 1.


Читайте также:
  1. Cпособы теоретического и экспериментального определения скорости движения транспорта.
  2. II. Основные определения
  3. II. Основные определения
  4. А. АНТИБИОТИКИ – ИНГИБИТОРЫ СИНТЕЗА СТЕНКИ МИКРООРГАНИЗМОВ
  5. Алгебраический метод определения точки безубыточности
  6. Алгоритм действий определения эффективности инвестиций в корпоративное образование
  7. Алгоритм Магу для определения множества внешней устойчивости.
  8. Алгоритм Магу для определения множества внутренней устойчивости графа
  9. АЛГОРИТМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ ОРИЕНТАЦИИ БИНС
  10. Алгоритм определения предпочтительной организационной структуры управления диверсифицированной фирмой
  11. Анализ профессиональных ситуаций для определения их коррупционной и антикоррупционной составляющей
  12. Анализ сезонности в рядах динамики после определения и исключения общей тенденции развития в них

Таблица 1. Критерии интерпретации чувствительности бактерий

В определенных клинических ситуациях, когда недостаточно результатов исследования чувствительности обычными методами, определяют минимальную бактерицидную концентрацию.

 

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая при исследовании in vitro вызывает гибель 99,9% микроорганизмов от исходного уровня в течение определенного периода времени.

Значение МБК используют при терапии антибиотиками, обладающими бактериостатическим действием, или при отсутствии эффекта от антибактериальной терапии у особой категории больных. Частными случаями для определения МБК могут быть, например, бактериальный эндокардит, остеомиелит или генерализованные инфекции у пациентов с иммунодефицитными состояниями.

 

На сегодняшний день не существует методов, которые позволили бы с абсолютной достоверностью прогнозировать клинический эффект антибиотиков при лечении инфекционных болезней. Однако, данные результатов определения чувствительности могут служить хорошим ориентиром клиницистам для выбора и коррекции антибактериальной терапии.

 

Категория чувствительности микроорганизма Микробиологическая характеристика Клиническая характеристика
Чувствительный Не имеет механизмов резистентности Терапия успешна при использовании обычных доз
С промежуточной резистентностью Субпопуляция, находящаяся между чувствительной и резистентной Терапия успешна при использовании максимальных доз или при локализации инфекции в местах, где антибиотик накапливается в высоких концентрациях
Резистентный Имеет механизмы резистентности Нет эффекта от терапии при использовании максимальных доз

 

 

Высокая частота устойчивости возбудителей гнойно-септических заболеваний к антибиотикам и изменение спектра и уровня устойчивости микробных популяций в течение болезни обусловливают необходимость определения их чувствительности перед назначением препарата и в процессе лечения. При использовании классических методов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам-метода серийных разведений в жидкой или плотной питательной среде, а также метода бумажных дисков – ответ может быть получен не ранее чем через 18 часов от начала исследования (с учётом времени, необходимого для выделения чистых культур – через 48-72 ч.)

 

Эффективность химиотерапии повышается при раннем назначении этиотропного лечения, которое можно обеспечить использованием методов и средств быстрого определения чувствительности к антибиотикам возбудителей заболеваний. Проведено ряд исследований, достоверно подтверждающих преимущества ускоренных методов. Так, в исследованиях Barenfanger и Doern c соавт. показано, что сокращение среднего времени исследования от 44,4 до 39,2 ч. сопровождалось сокращением койко-дня с 12,6 до 10,7 суток, снижением средней стоимости лечения пациента с 6677 до 4927 долларов США и летальности – от 9,6% до 7,9%.



 

Разработанные для этой цели методы могут были разделены на ускоренные, в которых исследуются выделенные чистые культуры возбудителей и экспресс-методы, позволяющие устанавливать антибиотикограмму возбудителей непосредственно в нативном материале или первичном посеве, т.е. без выделения чистых культур .

 

Ускоренные методы определения чувствительности микроорганизмов к химиопрепаратам дают возможность получить ответ спустя 2-6 ч. от начала исследования чистых культур. По принципу и механизму реакций, возникающих в результате действия антибиотиков, можно выделить 5 групп ускоренных методов, которые основаны на:

 

1) выявлении изменений ферментативной активности бактерий;

 

2) выявлении изменений окислительно-восстановительного потенциала среды развивающимися микроорганизмами;

 

3) цитоморфологической оценке изменений бактериальных клеток и формирования микроколоний;

 

4) определении изменений оптической плотности среды растущей популяцией или включения радиоизотопов в микробные клетки;

 

5) использовании специальных питательных сред с ростовыми стимуляторами .

 

1.Сущность методов 1-й группы заключается в следующем: в мясо-пептонный бульон с глюкозой добавляют антибиотик в необходимой концентрации, а затем засевают испытуемый штамм микробов. Устойчивые к данному антибиотику микроорганизмы усваивают глюкозу, что проявляется изменением кислотно-щелочного потенциала (pH) среды. Для определения изменений pH среды предложено использовать индикаторы, которые изменяют свой цвет при снижении pH – феноловый красный, индикатор Андреде и бромтимоловый синий.

 

2.Методы 2-й группы, получившие наибольшее распространение, основаны на выявлении изменений окислительно-восстановительного потенциала среды (rH2) развивающимися микроорганизмами в присутствии антибиотиков с помощью биологических или химических редокс-индикаторов. В связи с этим для определения чувствительности бактерий разных видов возможно использование одних и тех же индикаторов. Микроорганизмы, которые устойчивы к антибиотику, растут и размножаются в среде и снижают rH2 – потенциал, в результате чего индикатор, добавленный к питательной среде, изменяет свой цвет. Чувствительные микроорганизмы в зоне диффузии антибиотиков не размножаются и не изменяют rH2, вследствие этого цвет среды вокруг дисков не изменяется.

В качестве таких индикаторов нашли применение резузарин, суспензии человеческих, кроличьих или бараньих эритроцитов, 2,6-дихлорфенолиндофенол, 2,3,5-трифенилтетразолий хлорид, водные растворы красной кровяной соли и железоаммиачных квасцов, метиленовый синий, водный голубой с розоловой кислотой, молибденовокислый аммоний, соли азотной кислоты.

 

3.Цитоморфологические ускоренные методы основаны на том принципе, что микроорганизмы, чувствительные к антибиотикам при 3-4-часовом росте на средах с химиопрепаратами, не увеличивают размеров микробной клетки или не образуют микроколоний на специальных препаратах с питательными средами. Необходимость использования в методах этой группы либо специальных препаратов для установления изменений величины клеток, либо микрокамер, целлофановых пластинок или мембранных фильтров с последующим микроскопическим изучением формирования на них микроколоний в световом, фазово-контрастном или люминесцентном микроскопах делает эти методы трудоемкими и требующими специального технического оснащения.

 

4.Предложены ускоренные методы, основанные на выявлении динамики оптической плотности культур в присутствии антибиотика с помощью нефелометра или спектрофотометра.

5.Пятая группа ускоренных методов основана на использовании специальных питательных сред с ростовыми стимуляторами для достижения быстро регистрируемых изменений в среде. В качестве таких стимуляторов используют экстракт бычьего сердца и глюкозу, кровь и глюкозу, индолилмасляную и индолилуксусную кислоты, гибереллин.

 

 

М.И. Леви с соавт. предложили экспресс-метод определения чувствительности к антибиотикам возбудителей гнойно-септических инфекций. Для экспресс-анализа использован метод серийных разведений антибиотиков в цветной питательной среде, содержащей 0,002% индикатора бромкрезолпурпурного и 0,5% глюкозы. При росте устойчивых к антибиотикам микроорганизмов снижается рН питательной среды и индикатор изменяет свой цвет, чувствительные к антибиотикам микроорганизмы цвет среды не изменяют. Исследования проводили в пластмассовых планшетах, в луночках которых приготавливали разведения антибиотиков на цветной питательной среде. В контрольные лунки вносили только цветную питательную среду. Гнойное отделяемое из ран больных забирали ватным тампоном, смоченным цветной питательной средой, готовили разведения материала и по 0,05 мл добавляли в луночки планшетов с различными разведениями антибиотиков. Планшеты помещали в термостат до изменения исходного цвета питательной среды в контрольных лунках (без антибиотиков) в желтый (обычно 3-6 часов). Затем учитывали результаты анализа. Сохранение исходного цвета питательной среды в опытной луночке свидетельствовало о чувствительности микрофлоры к данной концентрации антибиотика, появление желтого цвета – об устойчивости микрофлоры к такой концентрации препарата.

 

Принципиально новый метод экспрессного определения лекарственной устойчивости микроорганизмов разработан на основе использования реакции ДНК-ДНК гибридизации. Принцип метода заключается в применении ДНК-зондов, выявляющих у микробов генетические детерминанты, кодирующие плазмидную или хромосомную резистентность микробной популяции к определенным типам или группам антибиотиков. ДНК-зонды метятся радиоактивной, люминесцентной или ферментной меткой. При использовании ДНК-зондов не требуется выделение чистой культуры микробов или подращивания материала на питательных средах, что значительно сокращает сроки исследования.

 

Чувствительность реакции ДНК-ДНК гибридизации может быть значительно повышена при предварительном использовании полимеразной цепной реакции, в которой за 30-40 циклов в течение часа из одного ДНК-фрагмента можно получить до 108 ампликонов. После накопления ДНК и ее рестрикции эндонуклеазами генетический анализ фрагментов проводят в реакции ДНК-ДНК гибридизации. Благодаря высокой специфичности и чувствительности совместного применения полимеразной цепной реакции и метода молекулярной гибридизации обеспечивается возможность получения результатов в течение 6-8 часов от начала исследования нативного материала. Однако, необходимость наличия сложного и дорогостоящего оборудования и реактивов ограничивает использование методов молекулярной диагностики в практике.

 


Методы определения чувствительности к антибиотикам <== предыдущая страница |следующая страница ==> Предмет и методы эпидемиологии.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском google:

 

© studopedia.ru При использовании или копировании материалов прямая ссылка на сайт обязательна.


Генерация страницы за: 0.067 сек.