Рожа свиней — инфекционная болезнь, характеризующаяся при остром течении септицемией и воспалительной эритемой кожи, при хроническом — эндокардитом и артритами. Спорадически может встречаться у лошадей, крупного рогатого скота, овец, северных оленей, собак, диких млекопитающих, птиц, восприимчив человек.
Возбудитель болезни — грамположительная палочковидная бактерия Erysipelothrix rhusiopathiae, относящаяся к роду Erysipelothrix.
Лабораторная диагностика болезни основана на результатах бактериологического серологического исследования.
Бактериологическое исследование. В лабораторию направляют труп животного целиком или сердце (при хроническом течении - обязательно), печень, селезенку, почку, трубчатую кость. При артритах берут синовиальную жидкость. При необходимости материал консервируют 30%-ным стерильным водным раствором глицерина.
Микроскопическое исследование исходного материала. Из материала готовят мазки, окрашивают по Граму, а также люминесцирующими рожистыми сыворотками. При хроническом течении обязательно делают мазки с поверхности измененных клапанов сердца. В мазках, окрашенных по Граму, в положительных случаях обнаруживают грамположительные, прямые или слегка изогнутые тонкие палочки размером 0,2-0,3 мкм шириной, 2,5 мкм длиной с закругленными концами, без спор и капсул. Клетки располагаются единично, группами, в виде коротких цепочек, некоторые под углом друг к другу.
|
|
В препаратах из пораженных клапанов сердца свиней (хроническое течение) возбудитель имеет нитевидную форму с тенденцией клеток к обесцвечиванию.
Выделение и идентификация культуры возбудителя. Культивирование. Возбудитель болезни — E. rhusiopathiae является факультативным анаэробом, в первой генерации ведет себя как микроаэрофил. Температурный оптимум 36-37° С, оптимум рН 7,4-7,8. Культуры в S-форме лучше растут при 33° С и рН 7,6-8,2; R-формы — при 37° С и рН — менее 7.Посев исследуемого материала может быть произведен на МПА, МПБ, оптимальными средами являются кровяной агар, среды с 5-10% сыворотки крови и 0,2-0,5% глюкозы.
Контаминированный материал, особенно при исследовании миндалин на носительство возбудителя, высевают на селективные среды: среда ESB, среда МВА, среды, содержащие 0,1% азида натрия и 0,001% кристаллвиолета. Рекомендуется в этом случае делать посев на среду ESB с последующей пересевом на среду МВА. Жидкий материал рекомендуется центрифугировать, а седимент ресуспендировать в среде ESB. Если время не является лимитирующим фактором, рекомендуется инкубировать образцы тканей в флаконах с бульоном при 4-5° С в течение 4-5 недель, субкультуры засеять на среду МВА. Этот метод особенно подходит для выделения возбудителя из миндалин и кишечных лимфатических узлов. Прямой посев материала на плотные среды обычно менее эффективен и дает удовлетворительные результаты при использовании плотных селективных сред с кровью или сывороткой крови.
|
|
Характер роста возбудителя на питательных средах. На плотных средах возбудитель через 24-48 часов формирует мелкие (0,2-1,5 мм), круглые, выпуклые, прозрачные колонии с гладкой, блестящей поверхностью и ровными краями (S-форма). R-колонии менее выпуклые, с неровными краями и тусклой поверхностью. Кроме R-колоний могут встречаться промежуточные SR-формы. На кровяном агаре через 24 часа обычно формируются негемолитические колонии, спустя 48 часов может появиться узкая зона а -гемолиза. При посеве в МПЖ и культивировании в течение 3-5 дней при 22° С возбудитель растет в виде «лампового ершика» без разжижения желатины. Для просмотра посевов на плотных питательных средах лучше пользоваться стереоскопическим микроскопом.
В МПБ рост возбудителя сопровождается очень слабым помутнением среды без пристеночного кольца, пленки. Через 48-72 часа на дне пробирки появляется осадок, поднимающийся при встряхивании в виде облачка. На среде ESB посевы рекомендуется инкубировать не менее 48 часов.
Морфология Е. rhusiopathiae в культуре. В мазках из колоний
S-формы преимущественно находят палочковидные клетки (прямые или слегка изогнутые) размером 0,2-0,4 х 0,5-2,5 мкм, не обладающие подвижностью; из колоний R-формы — клетки типичной морфологии, а также цепочки из клеток и нити, которые могут достигать 4-15 мкм. Для выявления жгутиков культуру высевают уколом в полужидкий агар и инкубируют посевы 24 часа при 37° С. При обнаружении в первичных посевах культур с типичными для эризипелотриксов культуральными, морфологическими и тинкториальными свойствами их отвивают для дальнейшего изучения.
Ферментативные свойства эризипелотриксов. Род Erysipelothrix включает два вида: Е. rhusiopathiae и Е. tonsillarum, однако по фенотипическим свойствам эти виды неразличимы и могут быть дифференцированы только путем изучения гомологии ДНК. Пока единственным выявляемым фенотипическим отличием Е. tonsillarum является принадлежность всех известных штаммов этого вида к седьмому серовару. Следовательно, идентификация на родовом и видовом уровне представляет собственно видовую идентификацию Е. rhusiopathiae. Некоторые критерии дифференциации эризипелотриксов от сходных групп бактерий представлены в разделе «Листериоз».
У выделенных культур определяют способность образовывать каталазу, оксидазу, сероводород, уреазу, гидролизовать эскулин, ферментировать углеводы. Для выяснения сахаролитической активности применяют 1%-ную пептонную воду с добавлением 5-10% стерильной сыворотки крови лошади или кролика. Образование сероводорода целесообразно проводить посевом на среду Клиглер с учетом результата через 24 часа, хотя можно использовать и бумажки, пропитанные уксуснокислым свинцом.
Возбудитель не вырабатывает каталазу, оксидазу, уреазу, не гидролизует эскулин, образует сероводород.
Е. rhusiopathiae расщепляет с образованием кислоты без газа глюкозу, лактозу, декстрин, левулезу, галактозу, фруктозу, мальтозу; слабое образование кислоты регистрируется в средах с маннозой, иногда сахарозой. Обычно возбудитель не образует кислоту из сорбита, маннита, инозита, дульцита, рамнозы, сорбозы, глицерина, эритрита, амигдалина, салицина, трегалозы, инулина, мелицитозы, раффинозы, гликогена, ксилита, эскулина, целлобиозы. Индол не образует и не редуцирует нитраты. Желатин не разжижает, не утилизирует цитраты, тест Фогес-Проскауера — отрицательный. Негидролизует гиппурат натрия, твин-20, 40, 80. Вирулентные штаммы Е. rhusiopathiae образуют гиалуронидазу, но обычно этот тест в диагностической практике не используют.
|
|
Согласно «Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на рожу свиней» (1984) во внимание при идентификации возбудителя принимают образование сероводорода, каталазы, расщепление глюкозы, лактозы, сахарозы, маннита.
Серологическая идентификация эризипелотриксов. Ранее вид дифференцировали на серотипы от А до О. Штаммы типа А считали ответственными за острое и сверхострое течение эризипелоида; штаммы типа В обычно ассоциируются с хроническим течением эризипелоида. Типы А и В подразделяют на подтипы, причем у здоровых свиней чаще находят G и Н, но могут быть типы А и В; у крупного рогатого скота — С и Д; у рыб — С, Д, Е. Штаммы, не имеющие типового антигена, обычно относили к типу N. В настоящее время на основании антигенных вариаций соматического (термостабильного) антигена Е. rhusiopathiae подразделяют на 22 серовара, причем до 80% всех изолятов составляют штаммы сероваров 1 и 2.
В повседневной лабораторной практике проводят видовую серологическую идентификацию Е. rhusiopathiae в РА на стекле. С указанной целью испытуемую культуру выращивают 24 часа при 37° С на плотной питательной среде. На предметное стекло наносят каплю лечебной противорожистой иммунной сыворотки в разведении 1:50, в ней бактериологической петлей суспендируют выросшую бактериальную массу и учитывают результат. Серологическую идентификацию Е. rhusiopathiae можно проводить на различных стадиях изучения культуры при помощи прямого метода флуоресцирующих антител с применением рожистых люминесцирующих сывороток
Биопроба. Используют для выделения культуры возбудителя из исследуемого материала, а также определения вирулентности выделенных культур. В первом случае из паренхиматозных органов готовят суспензию на физиологическом растворе 1:10, которую вводят двум белым мышам массой 16-18 г подкожно в дозе 0,1-0,2 мл. Суточной бульонной культурой мышей заражают аналогичным образом и в той же дозе. Наблюдение за животными осуществляют в течение 5 суток. Гибель в положительных случаях наступает на 2-4 сутки, при заражении слабовирулентными штаммами — в более поздние сроки. Павших животных подвергают бактериологическому исследованию. Кроме того, рекомендуется заражать мышей бульонной культурой возбудителя интраперитонеально в дозе 0,1-0,4 мл. Гибель наступает на 1-4 сутки после заражения. Может быть использован для идентификации возбудителя тест пассивной защиты мышей с применением противорожистой лечебно-профилактической иммунной сыворотки. В случае необходимости вирулентность изолята определяют на свиньях, используя для заражения метод кожной скарификации. С целью дифференциации от листерий культура может быть проверена в кератоконъюнктивальной пробе на морских свинках (см. «Листериоз»).
|
|
Питательные среды. Для выделения культур лучше всего использовать питательные среды с 5-10% сыворотки крови и 0,2-0,5% глюкозы. При исследовании материала контаминированного посторонней микрофлорой, целесообразно пользоваться селективными средами.
Селективная среда ESB. В 1000 мл стерильного питательного бульона вносят 50 мл сыворотки крови лошади, 400 мг канамицина, 50 мг неомицина, 25 мг ванкомицина. Среда пригодна для использования в течение 12- 14 дней хранения при 4° С.
Селективная среда МВА. В 1000 мл питательного агара добавляют
0,4 г азида натрия. Стерилизуют при 121° С 15 минут и асептически вносят 50 мл сыворотки крови и 20 мл крови лошади.