Лабораторная диагностика клостридиозов

Среда Бабича М.А., Дигальцева Ю.М. и Фоменко А.С.

A. Основа среды (95-97% общего объема среды) — ¹/₅₀ М фосфатный
буфер, который автоклавирован при 127°С в течение 1,5 часов.

Б. Альбуминовая фракция сыворотки крови овец. Готовится методом вы­саливания; диализированный раствор альбумина фильтруют через пластины «СФ» и добавляют к основе среды 150-250 мг% (в пересчете на сухое вещество).

B. Фактор роста — состоит из нативного экстракта печени овец с включе­нием витаминов, микроэлементов и биоактиваторов. В процессе изготовления нативного экстракта печени к нему добавляют: хлористого магния — 25 мг/л; молибденового натрия — 1 мг/л, хлористого цинка —
2 мг/л, карбамида —10 мг/л, никотиновой кислоты — 2 мг/л, калиевой соли индолиуксусной кис­лоты — 2 мг/л, тиамина — 20 мг/л, рибофлавина — 0,1 мг/л, кобаламина —0,02 мг/л. Этот фактор добавляют к основе среды в количестве 0,5-1%.

Твин-альбумин сывороточная среда Эллиса. В 998 мл дистиллированной воды растворяют Na₂HP0₄ — 1 г, КН РО₄ — 0,3 г, NH₄C1 — 1 мл, глицерин — 1 мл; растворяют компонен­ты, устанавливают рН 7,4, удаляют 140 мл среды, вносят 1,5 г очищенного агара, стерилизуют (121° С, 20 мин), охлаждают до 50° С, добавляют 140 мл основной среды, фильтруют через мембранные фильтры с размером пор 0,22 микрон и разливают по пробиркам.Приготовление растворов компонентов среды: в 100 мл стерильной ди­стиллированной воды растворяют раздельно ZnS0₄ х 7Н₂0 — 0,4 г, СаС1₂ хх 2Н₂0 —1,0 г, глицерина — 10,0 мл, NH₄C1 — 25 г, витамин В,₂ — 0,02 г, тиамин — 0,5 г, MgS0₄ — 0,3 г. Растворы до использования можно хра­нить до 30 суток при 4 —5° С. Ex tempore готовят следующие растворы компонентов. В дистиллированной воде разводят FeS0₄x 7Н₂0 — 0,5 г/ 100 мл Н₂0, твин-80 — 20 мл/180 мл Н₂0, твин-40 — 20 мл/180 мл Н₂0, 5-флюорацил —1,0 г/100 мл Н₂0, налидиксовая кислота —1,0 г/100 мл Н₂0, MgCl,x 6H₂0 — 0,016 г/100 мл Н₂0.

Приготовление основной среды: в 50 мл стерильной дистиллированной воды растворяют 10,0 г бычьего альбумина, 1,0 глактальбумина-гидролизата, за­тем вносят растворы тиамина — 1 мл, СаС1₂ х 2Н₂0 —
1 мл, MgS0₄ — 1 мл, ZnS0₄x 7 Н₂0 — 1 мл, MgCl₂x6 Н₂0 — 1 мл, ZnS0₄ x 7 Н₂0 — 1 мл, FeS0₄ x 7 Н₂0 — 10 мл, витамина В₁₂ — 1 мл, твина-80 —

9 мл, твина-40 — 3-5 мл. После растворения компонентов устанавливают рН 7,4, вносят дистиллиро­ванную воду до 96 мл и 4 мл кроличьей сыворотки, инактивированной при 56° С (30 минут), флюорацила —
20 мл, налидиксовой кислоты — 20 мл.

Среда с 5-флюорацилом. В питательную среду (жидкую, полужидкую, плотную) вносят 100 - 400 мкг/мл 5-флюорацила.

В род Clostridium относят палочковидные микроорганизмы (0,3-0,2х1,5-20,0), плеоморфные, в молодых культурах окрашиваются по методу Грама положительно, подвижные, образуют овальные или сфиерические споры, каталазоотрицательные, облигатные анаэробы.

Патогенные клостридии подразделяют на нейротоксические
(C. botulinum, C. teteni), гистотоксигенные (C. chauvoei, C. septicum,
C. novyi, C. sordellii, C. colinum) и энтеротоксемические (С. рerfringens).