Питательные среды. Идентификация возбудителя по ферментативным свойствам

Идентификация возбудителя по ферментативным свойствам

При изучении ферментативных характеристик определяют способность культуры образовывать индол, каталазу, сероводород, уреазу, желатиназу, гемолизин, разлагать мясо, гидролизовать крахмал, эскулип, образовывать кис­лоту из сахаров и высокоатомных спиртов. При пересеве культур соблюдают требования относительно создания анаэробиоза, изложенные выше.

Для исследования указанных признаков используют обычные методы или коммерческие анаэробные идентификацион­ные системы API 20A, API-ZYM, ATB 32A, Minitec anaerobic II и др. Для B.nodosus характерна инертность в отношении углеводов и многоатомных спиртов, образование сероводорода, желатиназы, разложение мяса, отсут­ствие индола, гемолизина, уреазы, пигмента на агаре с лаковой кровью, отсутствие роста или очень слабый рост на питательных средах с 20% жел­чи крупного рогатого скота.

Серологическая идентификация B.nodosus. На стадии работы со смешанными и чистыми культурами B.nodosus иден­тификация возбудителя может быть проведена при помощи непрямого мето­да иммунофлуоресценции.

Биопроба. Проводят с целью обнаружения возбудителя в исследуемом материале. Ла­бораторные животные к B.nodosus не чувствительны. Биопробу ставят на здоровых овцах (ягнятах). Материал используют в нативном виде или раз­водят стерильным физиологическим раствором 1:5. В межпальцевой щели скальпелем делают 10-15 поверхностных линейных разрезов эпидермиса кожи и втирают исследуемый материал. Дополнительно в копытцевые щели помещают ватные тампоны, пропитанные материалом, и копытца на 2-3 дня забинтовывают. Заражение овец проводят в две конечности, животных содержат на влажной подстилке. Как положительный результат биопробы расценивают появление на 4-6-е сутки карманов в результате отторже­ния рогового и производящего слоев эпидермиса. Позднее отслаиваются внутренние боковые стенки копытец, и через 2-3 недели процесс распрос­траняется на подошву и наружные боковые стенки. По мере развития про­цесса из пораженных тканей готовят мазки и микроскопически подтверж­дают наличие B.nodosus.

В соответствии с действующей инструкцией «Лабораторная диагнос­тика копытной гнили овец и коз» лабораторный диагноз на копытную гниль в РФ устанавливают на основании результатов микроскопического ис­следования материала с подтверждением, в случае необходимости, в био­пробе.

Рецепты базовых питательных сред для культивирования B.nodosus изло­жены в других разделах (Brucella-агар, агар Schadler и др.).