В сыворотке крови человека

Условия проведения реакции:

1. Приготовление растворов из концентратов согласно инструкции, прилагаемой к ИФА набору: раствор для промывания планшетов, конъюгат МКАТ с пероксидазой (Кг-Е), субстрат-хромогенную смесь

2. Внесение калибрующих и исследуемых проб: Во все лунки стрипов внести по 95 мкл промывающего раствора. Внести по 5 мкл калибраторов (КА-КЕ) в 6 лунок. В остальные лунки внести по 5 мкл исследуемых сывороток. Рекомендуется ставить дублирующие пробы калибраторов и исследуемых образцов. Время внесения проб в один планшет не должно превышать 10 минут.

3. Инкубации: Закрыть планшет, предварительно перемешав его содержимое мягким пепетированием, и инкубировать в течение 20 мин при +37 С.

4. Промывание планшетов: по окончании инкубации содержимое лунок удалить путем стряхивания. Во все лунки планшета внести по 160-200 мкл промывающего раствора и инкубировать в течение 1 минуты. Процедуру промывания повторить 3 раза.

5. Внесение конъюгата МКАТ: во все лунки планшета внести по 100 мкл раствора конъюгата.

6. Инкубация: закрыть планшет, предварительно перемешав его содержимое, и инкубировать в течение 15 мин при +37°С.

7. Промывание планшетов - промыть 4-кратно (см. пункт 4).

8. Проявление реакции субстрат-хромогенной смесью: во все лунки планшета внести по 100 мкл субстрат-хромогенной смеси. Инкубировать при температуре +18-22 С в защищенном от света месте в течение 10 минут.

9. Остановка реакции: во все лунки планшета внести по 50 мкл 2N серной кислоты.

Регистрация результатов

1. Регистрация оптической плотности (ОП): и змерить ОП содержимого лунок на фотометре при длине волны 492нм.

2. Построение калибровочной кривой: по значениям ОП и известным концентрациям калибраторов (см. табл. 2) построить кривую

Таблица 2.

Содержание IgE в калибраторах, выраженное в КЕ/л, следующее:

3. По значениям ОП для исследуемых сывороток с помощью калибровочной кривой определить содержание в них IgE в КЕ/л.