Работа № 3. Количественное определение 17-кетостероидов в моче

Количество 17-кетостероидов в моче у здорового человека составляет у мужчин 7-23мг/сутки и 6-18мг/сутки у женщин. Различные состояния напряжения (стресс) характеризуются повышением их экскреции до 1,5 раз и более. При раке коры надпочечников интенсивность экскреции 17-кетостероидов с мочой возрастает в 2-10 раз.

Принцип метода. При взаимодействии 17-кетостероидов с мета-динитробензолом образуются хромогены вишнево-красного окрашивания. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию 17-кетостероидов.

Ход работы: В 2 пробирки (контроль и опыт) прилить по 10 мл мочи, по 3 мл 6N соляной кислоты (НСl) и по 0,5 мл ледяной (концентрированной) уксусной кислоты. Смесь взболтать и поставить пробирки в кипящую водяную баню на 15 мин. Затем пробирки охладить и добавить по 10 мл этилового эфира, тщательно перемешать и верхнюю фазу (эфирный экстракт) отсосать в пробирки (контроль и опыт), выпарить эфир досуха в водяной бане при температуре 70-80^оС. В обе пробирки прилить по 0,2 мл этилового спирта, по 0,2 мл 3N едкого калия (КОН). В опытную пробирку добавить 0,2 мл 0,2% спиртового раствора мета-динитробензола. Затем пробы поставить в темное место на 1 час для развития окраски. После появления окраски в опытной пробе, в обе пробирки прилить по 4 мл этилового спирта и колориметрировать в кюветах, толщиной 10мм с зеленым светофильтром, опыт против контроля.

Количество 17-кетостероидов находят по калибровочному графику, построенному с 50 и 100 мкг андростенона.

Рассчитать уровень суточной экскреции 17-кетостероидов с мочой (мкг/сутки) учитывая объем суточной мочи (в мг) и результат содержания гормонов в 10 мл мочи по калибровочному графику.

Эталоны ответов на тесты

Вид 1. Тест 1: А, В, Д. Тест 2: 4

Вид 2 Тест 1: А-2; Б-2; В-1; Г-3; Д-3.

Тест 2: А-3, 5; Б-2, 3; В-4; Г-6; Д-1, 2, 5; Е-5.

Вид 3. Тест 1: 4→1→2→5→3→7→6→8→9.

Тест 2: 1-Б; 2-Г; 3-Б; 4-А; 5-Г; 6-В.

Вид 4. Тест 1: А (+, +, +). Тест 2: С (+, -,+).

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1.

А. Снижение секреции глюкокортикоидов в результате падения функции коры надпочечников под влиянием экзогенно вводимого гормона.

Б. При введении кортикотропина вероятность стимуляции функции коркового слоя надпочечников высока, что приведет к улучшению состояния больного.

Задача 2. Аспирин блокирует циклооксигеназу ферментативного комплекса синтеза простагландинов, оказывающих стимулирующее действие на центр мозга, регулирующий температуру тела.