Самостоятельная работа студентов. 1. Выделение чистой культуры аэробов из смеси бактерий (продолже­ние, начало смотрите на предыдущих занятиях)

1. Выделение чистой культуры аэробов из смеси бактерий (продолже­ние, начало смотрите на предыдущих занятиях).

Изучают культуру на скошенном МПА. Для проверки чистоты культуры вначале оцените характер роста визуально и если культура по виду чистая, делают мазок и красят его по Граму. Следует просмотреть несколько полей зрения, активно передвигая препарат в разных направлениях. Если культура чистая, засевают ее на короткий "пестрый" ряд (среды Гисса) с глюкозой, лактозой, сахарозой, пептонной водой.

Техника посева: в левую руку помещают одновременно две пробирки наклонно, с пробками на одном уровне; пробирка с культурой на скошенном МПА находится ближе к нам, а вторая, со средой, куда будет пересеваться культура, располагается кнаружи. Бактериологическую петлю стерилизуют в пламени спиртовки, мизинцем правой руки открывают обе пробки сразу, петлей берут культуру и переносят ее в засеваемую среду. Закрывают пробками обе пробирки одновременно, правой рукой ставят в штатив засеянную пробирку. Культурой со скошенного МПА последовательно засевают все пробирки.

Для определения протеолитических свойств бактерий производят посев культуры на пептонную воду с целью обнаружения продуктов расщепления пептона: индола и сероводорода. После посева под пробку пробирки укрепляют две узкие полоски фильтровальной бумаги, которые не должны соприкасаться с питательной средой. Одна полоска бумаги пропитана щавелевой кислотой (при наличии индола она приобретает розовый цвет), вторая пропитана ацетатом свинца (при наличии сероводорода она чернеет). Индол может быть обнаружен и по способу Эрлиха: после посева культуры в пробирку прибавляют 2-3 мл эфира, содержимое энергично перемешивают и добавляют несколько капель реактива Эрлиха (спиртовый раствор парадиметиламидобензальдегида с хлористоводородной кислотой).

Пробирки с посевами подписывают, ставят в термостат. Результаты работы заносят в протокол. Работа по выделению чистой культуры аэробов будет закончена на следующем занятии.

2. Выделение чистой культуры анаэробных бактерий из почвы (демонстрация).

· изучают характер роста культур анаэробов в столбике агара: для анаэробов характерно образование дисковидных колоний или колоний в виде клочков ваты, газообразование;

· исследуют характер роста анаэробных бактерий в трубках Вейон-Виньяля (демонстрация);

· учитывают рост возбудителя газовой гангрены на среде Вильсон-Блера и на молоке (демонстрация). Среда Вильсон-Блера состоит из МПА, глюкозы, хлористого железа, сернистокислого натрия. Возбудитель газовой гангрены (Clostridium perfringens) восстанавливает сернистокислый натрий до сульфида натрия, который вступает в реакцию с хлорным железом, переводя его в сернистое железо, имеющее черный цвет. Разрывы питательной среды объясняются образованием газа при расщеплении глюкозы. Молоко быстро свертывается, при этом образуется пористый сгусток, среда просветляется. Изменения на указанных средах наступают быстро - через 3-6 часов. Учесть биохимические свойства Clostridium perfringens.

3. Изучение характера роста Proteus vulgaris. Ha скошенном МПА (посев по Шукевичу). Окончание работы, начатой на предыдущем занятии. Наблюдается подвижность бактерий протея в препарате "раздавленная капля" (самостоятельная работа). Дать заключение по результатам исследования.