2015-04-01
978
Оборудование и реактивы: моча и плазма здоровой собаки (после введения гипосульфита), моча и плазма подопытной собаки (после введения гипосульфита), раствор йода (в разведениях 1/200 и 1/2000, крахмал в виде 1% раствора, пипетки на 2 мл, штативы).
Сущность используемого метода. Функциональная недостаточность почек проявляется в нарушении их способности очищать кровь от веществ, подлежащих удалению. Эту способность оценивают по объему плазмы крови, который почки могут очистить от введенного в кровь вещества за одну минуту. Причем, если вводить вещество, которое фильтруется в клубочках, то не реабсорбируется и не секретируется в канальцах (инулин, маннитол, креатинин, гипосульфит), то изменение способности почек очищать от него кровь будет характеризовать изменения процесса фильтрации.
Методика:
1. За 5-7 дней до исследования собаке подкожно вводился нефротоксический яд - азотнокислый уранил (0,5 мл/кг массы тела).
2. За 30-45 мин. до исследования животному подкожно вводится подогретый до 37оС 50% раствор гипосульфита и катетеризируется мочевой пузырь для сбора мочи и расчета минутного диуреза.
3. Через 30-45 мин. из вены шприцом забирается 5 мл крови, стабилизируется гепарином и центрифугируется в течение 15 минут при 3000 об/мин для отделения плазмы от форменных элементов крови. Белки плазмы крови осаждаются равным количеством 10% раствора трихлоруксусной кислоты.
4. Для определения концентрации гипосульфита к 1 мл супернатанта (что составляет 0,5 мл цельной плазмы) добавлять по 1-2 капле 1% раствора крахмала и титровать 1/2000 раствором йода (1 мл эквивалентен 0,00012411 г гипосульфита) до появления сине-голубого окрашивания.
5. Из порции мочи, взятой после введения гипосульфита, отдельными микропипетками набрать по 0,1 мл ее, поместить в пробирки, добавить по 1-2 капле 1% раствора крахмала и титровать 1/200 нормальным раствором йода (1 мл эквивалентен 0,0012411 г гипосульфита) до появления сине-голубого окрашивания. Для удобства работы можно предварительно мочу развести в 10 раз и взять не 0,1, а 1,0 мл.
Расчет клиренса по формуле:
где:
М - количество мл йода, идущего на титрование 0,1 мл мочи,
П - количество мл йода, идущего на титрование 1 мл плазмы,
Д - минутный диурез (мл/ мин)
Умножение числителя на 1000 необходимо для перевода количества гипосульфита в моче в мг%, т.к. для исследования брали не 100, а 0,1 мл ее. Умножение знаменателя на 200 необходимо для перевода количества гипосульфита в плазме в мг%, т.к. для исследования брали 1 мл супернатанта плазмы, что соответственно составляет 0,5 мл плазмы.
Д - у контрольной и подопытной собаки соответственно составляет 1 мл/мин и 0,7 мл/мин.
Сопоставить расчетные данные, обсудить результаты, сделать выводы.
