Приготовление живых препаратов микроорганизмов для микроскопирования

Цель работы: ознакомится с техникой приготовления прижизненных (временных) препаратов микроорганизмов.

Для наблюдения микроорганизмов под микроскопом необходимо соответ­ствующим образом приготовить препарат. Препарат готовят обычно на пред­метных стеклах толщиной 1,2 – 1,4 мм. Применение более толстых стекол нарушает фокусировку конденсора, что резко снижает четкость изображе­ния. Весьма существенным моментом является подготовка предметных сте­кол. Поверхность стекла должна быть тщательно очищена и обезжирена, чтобы капля жидкости равномерно растеклась по стеклу, а не собиралась в выпуклые, медленно высыхающие капли. Для этого сухое стекло необхо­димо тщательно натереть мылом, после чего вытереть чистой хлопчатобу­мажной салфеткой.

Покровные стекла, применяемые обычно для приготовления препаратов живых микроорганизмов (бактерий), также должны быть тщательно вымы­ты. Толщина покровных стекол не должна превышать 0,15 – 0,17 мм. Для микроскопирования с иммерсией требуются покровные стекла толщиной 0,09 – 0,12 мм. Для приготовления препаратов студент получает чистые культуры микроорганизмов, выращенные в пробирках на различных пита­тельных средах. Пробирки с культурами закрыты ватными пробками, кото­рые предохраняют их содержимое от попадания посторонних микроорганиз­мов из окружающего воздуха. Эти культуры называются чистыми, так как они выращены изолированно от посторонних микроорганизмов.

Для определения формы бактерий, способности их к спорообразованию, подвижности достаточно исследовать их в живом состоянии на препаратах «раздавленная» и «висячая капля».

Метод «раздавленная капля». На чистое предметное стекло при помощи микробиологической петли наносится небольшая капля водопроводной воды; дистиллированную воду брать не рекомендуется, так как в ней отсутствуют необходимая для микробов концентрация солей, что может вызвать изменение формы клеток, потерю ими подвижности и т. д. В каплю воды бактериологической петлей, прокаленной в пламене горелки и охлажденной, помещают исследуемый материал. Им могут служить настои мяса, рыбы, белка яйца, навоза, сена, картофеля, гороха и прочие, а также чистые культуры микроорганизмов.

Покровное стекло ставят на ребро у края капли и постепенно опускают на нее. При осторожном опускании покровного стекла между стеклами не остается пузырьков воздуха, мешающих микроскопированию. Капля должна быть небольшой, чтобы после «раздавливания» жидкость не выступала за края покровного стекла.

В препарате можно найти микро-, дипло-, стрептококки, бактерии, бациллы.

По характеру их движения можно предположить тип жгутикования (сами жгутики в живом препарате увидеть не удается): перитрих – кувыркающиеся движения, монотрих, лофотрих – направленное, стремительное. Споры в водном препарате отличаются от микрококков резкой очерченностью, сильно преломляют свет и кажутся блестящими или темными.

Препарат «раздавленная капля» быстро готовится, и позволяет установить форму клеток микроорганизмов, их размеры, способ спорообразования, а также наличие или отсутствие подвижности, но, к сожалению, является недолговечным.

Метод «висячая капля». «Висячей каплей» удобнее пользоваться для наблюдения подвижности микробов, их развития, размножения, прорастанием спор.

На покровное стекло наносят бактериологической петлей очень небольшую каплю препарата. Покровное стекло должно быть абсолютно обезжиренным. Опрокидывают покровное стекло над углублением специального предметного стекла. Края углубления предварительно смазывают вазелином. Капля должна висеть на покровном стекле над углублением предметного. Препарат может хранится долго.

Оборудование и материалы:

1) микроскоп АЛЬТАМИ 136;

2) препараты бактерий, предметные и покровные стекла, микробиологические петли.

Задание: приготовить прижизненные препараты из полученных у преподавателя культур; промикроскопировать сделанные препараты и зарисовать в тетрадь.