Ход работы. Задание № 1. Произвести определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с применением бумажных дисков

Задание № 1. Произвести определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с применением бумажных дисков.

Диско-диффузионный метод определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам основан на регистрации диаметра зоны подавления роста вокруг бумажного диска с антибиотиком. На поверхность питательного агара в чашках Петри, засеянного испытуемыми микробами, наносят бу­мажные диски, пропитанные антибиотиками, и чашки инкубируют при 37°С. Наличие зоны задержки роста микробов вокругдисков свидетельствует о чувствительности возбудителя к препарату, отсутствие зоны задержки роста – об устой­чивости.

Ход определения. В стерильные чашки Петри с МПА наносится культура микроорганизмов. В качестве посевного материала используется суточная бульонная культура – 0,2 мл бактериальной взвеси наносится на поверхность МПА и равномерно распределяется путем покачивания чашки с по­следующим отсасыванием избытка жидкости пипеткой.

Чашки подсушивают в течение 30-40 минут при комнатной температуре. Затем на поверхность засеянной сре­ды пинцетом накладывают диски, пропитанные различными антибиотиками. Диски накладывают на поверхность плот­но для тесного контакта со средой. Диски раз­мещают на равном расстоянии один от другого и примерно на 2 см от края чашки. Чашки ставят в термостат перевернуты­ми кверху дном или вкладывают под крышку чашки кружок фильтровальной бумаги, чтобы избежать размывания газона конденсационной водой, и инкубируют при 37°С в течение 18-ти часов.

Оценка результатов. С помощью линейки определяют диаметр зон за­держки роста микробов вокруг дисков, включая диаметр самого диска. Единичные колонии или тонкая пленка роста микроор­ганизмов внутри зоны задержки роста не учитывается. Отсутствие зон задержки роста микробов вокруг дисков указывает на отсутствие чувствительности микроба к данному антибиотику. При зоне задержки роста микроба диаметром до 10 мм штамм расценивается как мало чувствительный. Зона задержки роста микроба более 10 мм указывает на чувствительность штамма. Чем больше зона задержки роста, тем выше чувствительность микроорганизмов к антибиотику. Результаты занести в таблицу №10.

Таблица № 10. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам.

Контрольные вопросы

1. Антибиотики, их практическое значение. Антагонизм микроорганизмов.

2. Открытие антибиотиков.

3. Классификация антибиотиков.

4. Единицы биологической активности антибиотиков.

5. Биологическая роль в природе.

6. Антибиотические свойства стрептомицина.

7. Антибиотические свойства пенициллина.