2015-05-30
5020
В последние годы отмечают появление и распространение патогенных микроорганизмов
высоко-резистентных к действию факторов окружающей среды. Поэтому ужесточаются спосо
бы стерилизации и особое значение придают правильному выбору режима стерилизации
тщательному контролю ее качества. При выборе режима стерилизации необходимо учитывать
исходную контаминацию, которую оценивают не только количественно, но и качественно,
определяя устойчивость микроорганизмов к стерилизующему фактору. Исходная контамина
ция изменяется в зависимости от времени года и источника сырья. Определение стерильности. V
готовой продукции путем выборочного контроля не дает гарантии стерильности всей партии
поэтому необходимо строго соблюдать режим стерилизации.
Контроль эффективности стерилизации осуществляют несколькими методами
(Воробьёв А.А.с соавт., 2002): По
1) по показаниям приборов (мановакуумметров, термометров, таймеров);
2) физико-химические тесты (вместе со стерилизуемым материалом в аппарат закладываются ампулы с кристаллами веществ, имеющие определенную точку плавления и меняющие
консистенцию или цвет при достижении определенной температуры стерилизуемого материала, например, антипирин — температура плавления 113°С, резорцин — 110°С, бензойную кислоту — 121 °С). В состав химических тестов вводят анилиновый краситель фуксин, генцианвиолет и др.), который равномерно окрашивает вещество при его расплавлении. Контроль режима стерилизации автоклавов химическим способом проводят при каждой загрузке автоклава. В настоящее время для контроля параметров режимов работы паровых и воздушных стерилизаторов используются специальные бумажные термометры.
• химические индикаторы одноразового применения, типа ИС (фирма «Винар», Россия),
представляющие полоску бумаги с нанесенным на нее слоем индикаторной смеси и пред-
назначенные для оперативного визуального контроля не только температуры, но и време-
стерилизации (ИС-120, ИС-132). Бумажные полоски закладываются в разных местах со
стерилизуемым материалом и после окончания цикла сверяют изменение окраски индика-
тора с эталоном. Если индикатор светлее эталона, стерилизуемые объекты подлежат по-
вторной стерилизации;
•С 30 3) биологические тесты (в аппарат помещают флакончики с салфетками или бумажными дисками, пропитанными взвесью термостойкого спорообразующего микроба (Bacillus stearotermophilus) для контроля паровых или Bacillus licheniformis для контроля воздушных
I стерилизаторов) и после стерилизации их инкубируют в МПБ — прозрачный бульон, если
споры погибли, не должен мутнеть). Контроль режима стерилизации с использованием
• биотеста со спорами тест-культуры Bacillus stearotermophilus проводится еже-
квартально;
4) молекулярно-генетические методы контроля — генидикация могут использоваться в
случае оценки стерилизации в отношении трудно-культивируемых бактерий (анаэробная
группа) или вирусов. С этой целью применяют полимеразную цепную реакцию или об-
ратную гибридизацию ДНК с праймерами соответствующих видов микробов (Царёв В.Н.
с соавт., 2002).
Показателями эффективной работы стерилизационной аппаратуры являются: отсутствие
роста тест-культуры в сочетании с удовлетворительными результатами физического и химичекого контроля, либо отсутствие маркерных генов по данным ПЦР и гибридизации ДНК.
Контроль стерильности бактериологическим методом проводят путем прямого посева
(погружения) изделий в питательные среды (мелкие или детали разъемных изделий, инструменты — целиком, от шовного или перевязочного материала — отрезанные фрагменты) или (для крупных изделий) методом смывов. Материалом обязательно засевают две среды — тиогликолевую (для роста бактерий) и среду Сабуро (для роста грибов). Посевы на тиогликолевой среде выдерживают при 32°С, на среде Сабуро — при 22°С в течение 7 суток (для изделий после тепловой стерилизации). При отсутствии роста во всех пробирках (флаконах) делают заключение о стерильности изделий.
Р» и 7. Вид, штамм, колония, чистая культура микроорганизмов
Исследуемый материал от больного часто представляет смесь микроорганизмов. Выбор исследуемого материала зависит от вида заболевания и преимущественной локализации возбудителя на определенном этапе его развития (патогенеза). Материалом может служить кровь, ликвор, раневое отделяемое, мокрота, испражнения, моча и т.д.
При посеве исследуемого материала на питательные среды необходимо получить не смесь, а отдельные виды микроорганизмов. Микроорганизмы, находящиеся в питательной среде получили название культуры микроорганизмов. Культуры могут быть чистыми и смешанными. Поэтому основной задачей является разобщение культур и получение изолированных колоний. Изолированная колония, как результат размножения одной микробной клетки и состоящая из одного вида клеток, является основой для получения чистой культуры. Изучение и дальнейшая идентификация полученных культур микробов должна проводиться только в виде однородных популяций (чистых культур).
Под понятием «чистая культура» подразумевается популяция микроорганизмов, принадлежащих одному виду, полученная как потомство одной клетки на стерильной питательной среде методом механического разобщения. Культура может расти в виде отдельных колоний на плотной питательной среде. Штамм — это совокупность микробов одного вида, выделенных из одного источника в разное время или из разных источников.
Вид — совокупность микроорганизмов, имеющих единое происхождение и генотип, сходных по морфологическим и биологическим свойствам.
Таким образом, чистые культуры представлены микроорганизмами одного штамма и вида.
Популяция микробов, являющаяся потомством одной родительской клетки, полученная методом микроманипуляций, называется клоном. Клонирование бактериальных популяций возможно как на жидких, так и на плотных питательных средах.
Успех выделения чистой культуры определяется правильностью выбора питательной среды и условий культивирования. Универсальной питательной среды, использование которой позволит выделить любые микроорганизмы из любого исследуемого материала, не существует. Поэтому с учетом физиологических особенностей возможных возбудителей заболевания производится посев материала на определенную питательную среду или комплекс питательных сред (специальные, элективные, дифференциально-диагностические). Для некоторых микроорганизмов требуются и особые условия культивирования (анаэробные, микроаэрофильные, с повышенным содержанием углекислоты).
Бактерии характеризуются высоким темпом размножения на различных питательных средах, который характеризуется временем генерации.
Время генерации — это время между двумя делениями клетки, проходящее от момента появления клетки до момента деления (например, время генерации кишечной палочки — 20 мин, возбудителя туберкулеза — 14 час, табл. 16). Скорость размножения зависит от вида бактерий и условий культивирования (химического состава питательной среды, её агрегатного состояния, рН, температуры, аэрации, газового состава, наличия питательных веществ и стимуляторов роста и т.д.).
