Исследование клинического материала

Фекалии суспендируют в их консерванте, доставленные без него - в физио­логическом растворе 1:10 а истечения из матки - вотношении 1:5.

Высевы делают из каждого объекта на две чашки с дифференциальными средами (см. выше). При исследавании истечений из матки для лучшего роста возбудителей абортов в среды добавляют 5% сыворотки крови или 0,2% глю­козы.

Техника посева. На хорошо подсушенную среду у края чашки наносят две капли взвеси и шпателем растирают ее на небольшой площади, а затем, аторвав шпатель от среды, делают россев на астальной поверхнасти агара.

Одновременно взвеси сеют в среды обогащения (Мюллера, Кауфмана, селе­нитавую) в объемном отношении 1:5. Инкубация при 37⁰С.

Через 18-20 ч посевы просматривают, отбирают на каждой чашке по три типичные колонии или по пять подозрительных и изучают их вышеописанным порядком. На, кроме высева на среды Андредэ, делают посев и на трехсахарный агар с мочевиной (среда Крумвиде - Олькеницкого в модификации Ковальчука). Посевы делают штрихом по косяку, а затем уколамив столбик. Сальмонеллы не меняют цвета косяка, а столбик становится желто-бурым; от сероводорода он чернеет, а разрывы в нем указывают на газообразование на глюкозе; эшерихии изменяют цвет среды в синий, а протей, расщепляющий мочевину, - в оранже­во-красный.

Кровь высевают с целью накопления сальманелл в 6-7 пробирак или в 2­3 флакона с МПБ, лучше с дабавкой 10-20% бычьей желчи. Отношение объемов высеваемой крови и бульона 1:10. Посев надо делать сразу после взятия крови. Сгустки крови перед внесением в среду измельчают стерильной стеклянной палочкой. Инкубация при 37⁰С.

Через 18-24 ч из всех пробирок (флаконов) делают пересевы на чашки с дифференциальными средами. Инкубацию первичных посевов продолжают. Спустя 18-20 ч выросшие типичные или подозрительные колонии отбирают и изу­чают, как описа на выше, а при отсутствии роста делают повторные пересевы из сред накопления через 2,5 и 7 суток инкубации.

Дополнительные исследования необходимы, когда выделенная культура нетипична по ферментативным или серолагическим свойством. В обоих случаях надо убедиться, что культура чистая, для чего ее рассевают на чашки с МПА и изу­чают шесть наибалее типичных колоний в отношении серологических и биохими­ческих свойств. Затем надо исключить, что данная культура является эшерихией с замедленной ферментативной активностью. Для этого ее высевают в среды Андредэ с 4% лактозы и сахарозы и инкубируют до 10 суток. Культуру высева­ют также на цитратную среду Симманса, среду с салицином и повторно ставят пробы на образование индола и сероводорода.

Кроме того, самнительные культуры испытывают в реакции с сальманеллезным О-бактериофагом, лизирующим 75% сальмонелл.

Реакцию фаголизиса ставят с 4-18-часовой бульонной культурой, можно и со взвесью суточной агаровой культуры, на хорошо подсушенном МПА, рН 7,2-7,4, в чашке.

Тонко наттянутой пипеткой на агар наносят две капли культуры на расстоя­нии 3-4 см одну от другой. Точки нонесения культуры заранее отмечают. Когда капли впитаются в агар, на одну наносят каплю фага, разведенного 1:5 или неразведенного (как указано в этикетке), а на другую - каплю бульона (кон­троль). После подсыхания посевы выдерживают при 37⁰С 18-20 ч и учитывают результат.

В одной чашке можно ставить реакцию с 2-3 культурами. Дно чашки расчерчивают на два вертнкальных ряда клеток и два-три горизонтальных. В клет­ках делают насечки, маркируют их (см. Реакция фагализнса), пасле чего ставят реакцию вышеописанным порядком.

При необходимости предварительно испытывают культуры (колонии). Для этого чашку с агаром делят на 5-6 секторов. Микробную массу из каждой изучаемой колонии берут петлей и рассевают небольшим шпателем в пределах сектора. Затем в центр сектора наносят каплю фага.

Биологическое исследование правадят в неабхадимых случаях для праверкw вирулентнасти выделеннага штамма. 0,1-0,3 мл сутачнай бульаннай культуры ввадят 2-;-3 белым мышам падкажна. Живатные гибнут через 3-10 сутак.