1. МАЗКИ ИЗ РОТОГЛОТКИ
|
1.1. Сбор материала
| Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
|
1.2. Предобработка проб
| Не требуется.
|
1.3. Метод исследования
| ОТ-ПЦР
|
1.4. Условия хранения материала
| При температуре от 2 до 8°С – в течение трех суток.
При температуре минус 70°С или в жидком азоте – длительно.
Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. Температура хранения минус 200С не допускается.
|
1.5. Условия транспортирования материала
| В специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом:
- при температуре 0-4 0С – не более трех суток;
- при температуре минус 700С или в жидком азоте – длительно.
Температура транспортировки минус 200С допускается только с учетом однократного замораживания и транспортировки без размораживания не более 4 дней.
|
2. Мазки из полости носа
|
2.2. Сбор материала
| Мазки (слизь) берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. Зонд с ватным тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа.
Для метода иммунофлюоресценции забор материала для этого метода исследования производят перед другими манипуляциями. После взятия материала тампон помещают в пробирку с 2-3 мл 0,1 моль/л фосфатно-солевого буферного раствора. Для получения суспензии клеток тампоны в пробирке тщательно отжимают о стенки пробирки. Тампон удаляют. Пробирку закрывают.
Для ПЦР-анализа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
|
2.3. Предобработка проб
| Для метода иммунофлюоресценцииклетки осаждают центрифугированием в течение 5-6 мин при 3000 об/мин. Надосадачную жидкость осторожно удаляют, а клеточный осадок ресуспендируют в нескольких каплях ФСБ и наносят на предметные стекла (не менее 3 шт.) раздельными каплями. Препарат высушивают и фиксируют 10 мин в охлажденном до 2-80 С химически чистом ацетоне.
Для ПЦР-анализа - не требуется.
|
2.4. Метод исследования
| МФА, ОТ-ПЦР
|
2.5 Условия хранения материала
| Для метода иммунофлюоресценциификсированные неокрашенные мазки можно хранить при температуре от 2 до 8°С в течение 6-7 дней, при температуре минус 20°С – до 6 мес. Для ПЦР-анализа - см. п.п. 1.4.
|
2.6. Условия транспортирования материала
| Для метода иммунофлюоресценциив термоконтейнере с охлаждающими элементами при температуре от 0 до 4 °С. Для ПЦР-анализа -см. п.п. 1.5.
|
3. Смывы из полости носа
|
3.1.Сбор материала
| Сбор материала производят в положении больного сидя с отклоненной назад головой. Для получения смыва из полости носа в оба носовых хода поочередно с помощью одноразового шприца вводят по 3-5 мл теплого стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида. Промывную жидкость из обоих носовых ходов собирают через воронку в одну стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием.
|
3.2. Предобработка проб
| Не требуется.
|
3.3. Метод исследования
| ОТ-ПЦР
|
3.4. Условия хранения материала
| См. п.1.4.
|
3.5. Условия транспортирования материала
| См.п.1.5.
|
4. Смывы из ротоглотки
|
4.1. Сбор материала
| Перед сбором материала необходимо предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10-15 сек) 8-10 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через воронку в стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием.
|
4.2. Предобработка проб
| Не требуется.
|
4.3. Метод исследования
| ОТ-ПЦР
|
4.4. Условия хранения материала
| См. п.1.4.
|
4.5. Условия транспортирова-ния материала
| См.п.1.5.
|
5. НОСОГЛОТОЧНОЕ ОТДЕЛЯЕМОЕ
|
5.1. Сбор материала
| Производится натощак после взятия мазков из полости носа. Осуществляется двумя способами:
1. Больной в три приема прополаскивает горло 10-15 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Смыв собирают в одноразовые полипропиленовые флаконы с завинчивающимися крышками объемом 50 мл. Ватными тампонами, зажатыми пинцетом, протирают заднюю стенку глотки и носовые ходы. Ватные тампоны опускают во флакон со смывом.
2. Сухим или слегка увлажненным 0,9 % раствором натрия хлорида тампоном, который удерживают с помощью пинцета, протирают заднюю стенку глотки и опускают его в пробирку с 5 мл стабилизирующей среды (приложение 3). Процедуру повторяют 2-3 раза. Все тампоны от одного больного собирают в одну пробирку. После взятия материала с задней стенки глотки тщательно протирают носовые ходы небольшими ватными тампонами и опускают их в ту же пробирку. Пробирку закрывают.
|
5.1. Предобработка проб
| Тампоны прополаскивают в стабилизирующей среде, в которой они содержались, отжимают о стенку сосуда и удаляют. Смыв отстаивают в холодильнике 40-60 мин. Центрифугирование и фильтрацию не проводят. Для выделения вируса используют среднюю часть отстоя, которую небольшими порциями переносят в 3 стерильные пробирки. Одну используют для выделения вируса, остальные замораживают при температуре мунус 70 0С или в жидком азоте.
|
5.3. Метод исследования
| Выделение вируса
|
5.4. Условия хранения материала
| При температуре от 2 до 8 °С – не более 3 дней.
При температуре минус 70°С или в жидком азоте – длительно.
Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. Температура хранения минус 200С не допускается.
|
5.5. Условия транспортирования материала
| См. п.п. 1.5.
|
6. Фекалии
|
6.1.Сбор материала
| Используют пробы фекалий массой (объемом) 1-3 г (1-3 мл). Исследование мазков неинформативно из-за низкого содержания в них возбудителей.
Фекалии забирают из предварительно продезинфицированного горшка или подкладного судна. Пробу в количестве 1 грамма (примерно) отдельным наконечником с аэрозольным барьером или одноразовыми лопатками переносят в специальный стерильный флакон.
|
6.2. Предобработка проб
| При исследовании нативных фекалий без предшествующего замораживания готовят фекальную суспензию (при водянистой консистенции фекалий в виде прозрачной жидкости фекальную суспензию не готовят).
Приготовление фекальной суспензии:
В соответствующее пробам количество микроцентрифужных пробирок (объемом 1,5 мл) вносят 0,8 мл фосфатного буфера (стерильного изотонического раствора натрия хлорида).
В каждую пробирку отдельным наконечником с аэрозольным барьером (или одноразовыми лопатками) вносят 0,1 г (0,1 мл) фекалий и тщательно ресуспендируют на вортексе до образования гомогенной суспензии.
При невозможности исследования материала в течение суток и/или необходимости длительного хранения к 10-20%-й суспензии фекалий в фосфатном буфере (или стерильном изотоническом растворе натрия хлорида) добавляют глицерин в конечной концентрации 10-15%. Подготовленные таким образом пробы замораживают только после тщательной гомогенизации и экспозиции с глицерином в течение 30-40 минут.
Приготовление осветленного экстракта фекалий:
Для приготовления осветленного экстракта фекалий используют фекалии водянистой консистенции, свежеприготовленную суспензию фекалий или суспензию, подвергавшуюся замораживанию с глицерином.
Взвесь фекалий интенсивно гомогенизируют на вортексе.
Осветляют полученную суспензию путем центрифугирования при 10 тыс. g (12 тыс об./мин. на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf, Германия) в течение 5 минут.
Супернатант (0,1 мл) смешивают с отрицательным контрольным образцом (ОКО) (0,1 мл) в соотношении 1:1 и используют непосредственно для выделения РНК. При необходимости хранения супернатант отбирают в отдельную одноразовую пробирку.
|
6.3. Метод исследования
| ОТ-ПЦР
|
6.4. Условия хранения материала
| См.п.1.4.
|
6.5. Условия транспортирования материала
| См. п.1.5.
|
6. СЕКЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ
|
7.1.Сбор материала
| В качестве секционного материала используются ткани легких, трахеи, сегментарных бронхов, селезенки. Секционный материал собирают в одноразовые полипропиленовые флаконы с завинчивающимися крышками объемом 50 мл.
|
7.2. Предобработка проб
| Кусочки органов гомогенизируют в стерильных фарфоровых ступках и готовят 10 % суспензию на стерильном 0,9 % растворе натрия хлорида или фосфатном буфере. Суспензию переносят в микропробирку на 1,5 мл и центрифугируют при 10000 оборотах в течение 30 секунд. Супернатант используют для выделения РНК.
|
7.3. Метод исследования
| ОТ-ПЦР
|
7.4. Условия хранения материала
| См.п.1.4.
|
7.5. Условия транспортирования материала
| См. п.1.5.
|
| | | | |
ФГУЗ «ЦГиЭ» в г. Санкт-Петербурге
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Карелия
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Коми
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Архангельской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Вологодской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Калининградской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ленинградской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Мурманской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Новгородской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Псковской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Воронежской области
|
ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии»
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Белгородской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Брянской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Владимирской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ивановской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Калужской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Костромской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Курской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Липецкой области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Московской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Орловской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Рязанской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Смоленской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Тверской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Тульской области
|
ФГУЗ «Противочумный центр Роспотребнадзора»
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ярославской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Нижегородской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Самарской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Башкортостан
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Марий-Эл
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Мордовия
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Татарстан
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Удмуртия
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Чувашской Республике
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Кировской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Оренбургской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Пензенской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Пермском крае
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Саратовской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ульяновской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ставропольском крае
|
Ставропольский противочумный НИИ
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Ростовской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Краснодарском крае
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Калмыкия
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Кабардино-Балкарской Республике
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Дагестан
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Северная Осетия
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Астраханской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Волгоградской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Адыгея
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Карачаево-Черкесской Республике
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Свердловской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Курганской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Тюменской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Челябинской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Омской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Красноярском крае
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Алтайском крае
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Бурятия
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Тыва
|
ФГУЗ «ЦгиЭ» в Республике Алтай
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Иркутской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Кемеровской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Новосибирской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Томской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Читинской области
|
Хабаровская противочумная станция
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Хабаровском крае
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Приморском крае
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Амурской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Магаданской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Республике Саха (Якутия)
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Камчатской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Сахалинской области
|
ФГУЗ «ЦГиЭ» в Еврейской автономной области
|