2015-06-10
1025
Основой цветной пробы, как метода индикации вируса, является нарушение метаболизма культуры клеток ткани в результате его репродукции. Рост клеток сопровождается накоплением кислых продуктов метаболизма, сдвигом рН в кислую сторону и изменением цвета индикатора фенолового красного с красного на желтый. Вирусы ингибируют клеточный метаболизм и среда сохраняет первоначальный цвет. Критерием достоверности полученных результатов является контрольная незараженная культура клеток ткани.
III. Ознакомьтесь с питательными средами, солевыми растворами, растворами ферментов, используемыми для приготовления и культивирования культур клеток ткани in vitro.
Культуры клеток ткани, используемые для культивирования вируса, получают чаще всего из эмбриональных или опухолевых тканей. Различают первичные, перевиваемые и полуперевиваемые типы культур клеток.
Приготовление первичных культур включает следующие этапы:
- измельчение ткани на фрагменты и отмывание в растворе Хенкса от крови, клеточного детрита и др;
- диспергирование клеток путем обработки 0,25% раствором трипсина;
- отмывание раствором Хенкса полученной суспензии клеток и помещение ее в концентрации 200-400 тыс/мл в культуральные сосуды (пробирки, пенициллиновые флаконы и др.), куда вносится соответствующая питательная среда (199, 199 с добавлением бычьей сыворотки и др.);
- термостатирование культуральных сосудов при 37° в течение 2-3 дней для формирования монослоя.
Состав солевых растворов и питательных сред, применяемых в вирусологии, обеспечивает сохранение, рост и размножение in vitro эукариотических клеток.
Раствор Хенкса: набор неорганических солей, глюкоза, феноловый красный (обеспечивает сохранение рН, осмотическое давление и состав необходимых неорганических веществ).
Среда 199: содержит более 60 компонентов, в том числе 20 аминокислот, 17 витаминов, составные части нуклеиновых кислот, глюкозу, 8 минеральных солей и др.
Бычья сыворотка: вводится в состав питательных сред в качестве дополнительного источника белкового питания, витаминов, факторов роста.
7. Список тем по УИРС, предлагаемый кафедрой:
- Прионы. Медленные инфекции, вызываемые прионами (прионные болезни).
- Онкогенные вирусы и онкогенные инфекции.
8. Рекомендуемая литература:
- Основная
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / Гл. ред. А.А. Воробьев.- 2-е изд., испр. и доп. – М.: ООО «Мед. инф. агентство», 2006. – с. 99-105.
- Дополнительная
1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А. Воробьева, А.С. Быкова-М.: МИА, 2003.-С.99-103.
2. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. /Учебное пособие. – М., 2005, с. 68-91
3. Поздеев О.К. Медицинская микробиология / Под. ред. акад. РАМН В.И Покровского. – М.:ГЭОТАР Медицина, 2004 г., с. 89-97, 272-277
4. Лекции по микробиологии.
- Учебно-методические пособия
1. Перьянова, О.В. Общая и частная микробиология (тестовые задания для студентов специальности 060108 – фармация) / О.В. Перьянова, А.И.Степанова, О.Е.Хохлова. – Красноярск: типография КрасГМА, 2008.
