Тема 12. Санитарно-микробиологическое исследование воды. Определение коли-титра и коли-индекса воды

Вода является естественной средой обитания многих микроорганизмов. Особую опасность для здоровья человека и животных представляют патогенные бактерии, которые могут содержаться в ней.

Источниками загрязнения воды патогенными микроорганизмами являются выделения больных животных и людей, трупы животных, сточные воды, особенно с предприятий, перерабатывающих животное сырье и др.

Длительность выживания патогенных микробов в воде зависит от их вида, условий окружающей среды и может составлять от нескольких часов до нескольких лет. Так, возбудитель сибирской язвы может сохраняться в воде до 3 лет, возбудитель туберкулеза — до 1 года, возбудитель бруцеллеза — до 100 дней.

Имеется группа болезней, для которых характерен водный путь распространения (паратифы, лептоспирозы).

Таким образом, вода может стать источником распространения инфекционных болезней, возникновения эпидемий и эпизоотий. Для санитарно-бактериологической оценки воды проводят следующие исследования:

1) определение количества МАФАнМ в 1 мл;

2) определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ);

3) обнаружение в воде патогенных микроорганизмов проводят по эпидпоказаниям. Для санитарно-микробиологического исследования пробы воды отбирают из источника в объеме не менее 500 мл. Из открытых водоемов их набирают батометром. Батометр — стерильная емкость с пробкой, в металлическом каркасе и со свинцовым грузилом. На нужной глубине пробку открывают, подтягивая ее за веревочку. Воду из рек, озер отбирают с глубины 10–15 см от поверхности, а при небольшой глубине — на расстоянии 10–15 см от дна.

Для отбора проб водопроводной воды из крана набирают 500 мл в стерильные колбы с ватной пробкой с соблюдением правил асептики. Кран предварительно стерилизуют горящим спиртовым тампоном, затем в течение 10 мин спускают воду и только потом берут пробы, которые исследуют сразу или не позднее 2 ч с момента взятия. Если это невозможно, то их хранят не более 6 ч обязательно при температуре +1...+5_С в холодильнике.

Определение количества МАФАнМ в водопроводной воде. В чашку Петри с соблюдением правил асептики вносят 1 мл водопроводной воды без предварительного разведения, заливают расплавленным и охлажденным до температуры +50_С МПА (методом горячей заливки). Посевы инкубируют 24–48 ч в термостате при температуре +30_С. После указанного срока приступают к подсчету количества колоний, выросших как на поверхности, так и в глубине агара. Учитывают только те разведения, при посеве которых на чашках вырастает от 30 до 300 колоний.

При посеве воды без разведений количество бактерий в 1 мл воды будет равно количеству выросших колоний. При определении количества МАФАнМ в воде открытых

водоемов исследуемую воду предварительно разводят стериль -1:10^-1 до 1: 10^-4, из двух последних разведений вносят по 1 млв стерильные чашки и заливают расплавленным и охлажденным до температуры +50_С МПА. После инкубирования притемпературе +30_С в термостате в течение 24–48 ч подсчитывают количество колоний, умножают на степень разведения водыи определяют количество бактерий в 1 мл воды открытых водоемов. Учету подлежат чашки Петри, в которых выросло от 30до 300 колоний. Колонии считают в каждой чашке отдельно,определяют среднеарифметическое число по двум чашкам. Полученное число умножают на степень разведения исследуемойводы и получают число бактерий в 1 мл воды.

Определение коли-титра (КТ) и коли-индекса (КИ) воды.

Колититром называют наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка.

Колииндекс показывает число кишечных палочек в 1000 мл воды.

Кишечная палочка является постоянным обитателем кишечника человека и животных, следовательно, ее присутствие в питьевой воде является индикатором фекального загрязнения, поэтому она отнесена к санитарно-показательным микроорганизмам. Чем выше концентрация бактерий группы кишечной палочки, тем вероятнее присутствие в исследуемой воде патогенных бактерий, таких как сальмонеллы, возбудители дизентерии и холеры. Показатели КТ и КИ указывают на санитарное состояние воды, ее пригодность в качестве питьевой.

Коли-титр и коли-индекс определяют двумя методами:

1) метод бродильных проб;

2) метод мембранных фильтров.

При исследовании чистой воды удобнее пользоваться методом мембранных фильтров. Если вода содержит механическиечастицы, затрудняющие процесс фильтрации, лучше пользоваться бродильным методом.

Метод бродильных проб. Суть этого метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды в питательные среды накопления с индикатором и поплавками, инкубации ее при температуре +37_С, с последующим пересевом из забродивших пробирок на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и вычислении коли_титра воды по нормативам.

Данный метод основан на ферментативной способности БГКП расщеплять при помощи ферментов лактозу или глюкозу до кислоты и газа. Исследуемая вода засевается в различных объемах в глюкозопептонную среду с индикатором и поплавками, при наличии кишечной палочки появляется помутнение, меняется цвет индикатора (желтый цвет переходит в красный) и появляются пузырьки газа в поплавках. Воду методом бродильных проб исследуют в три этапа (три дня):

Первый день. Засевают водопроводную воду в объеме 333 мл (три объема по 100 мл, три — по 10 мл и три — по 1 мл). При этом вода в объемах по 100 и 10 мл засевается в колбы и пробирки соответственно — с 10 и 1 мл концентрированной ГПС, а посев воды в объеме 1 мл— в пробирки с 10 мл среды с нормальной концентрацией (готовят как концентрированную, но количество всех ингредиентов, кроме воды, уменьшают в 10 раз). Посевы исследуемой воды в средах ГПС культивируют в термостате 24 ч при температуре +37_С.

Второй день. Ведется учет результатов посева разных объемов воды, при котором:

-отсутствие помутнения, образования кислоты и газа в колбах и пробирках после посева воды свидетельствуют об отсутствии кишечной палочки в исследуемом объеме воды;

-помутнение питательной среды, изменение цвета индикатора на красный и появление газа в поплавках говорят о наличии кишечной палочки. Из каждого забродившего посева петлей делают пересев штрихом на агар Эндо, разделенный на сектора в чашках Петри, таким образом, чтобы появились изолированные колонии. Посевы культивируют 24 ч при температуре +37_С.

Третий день. Ведется учет результатов посева на агаре Эндо, при котором:

-отсутствие роста на агаре Эндо или наличие колоний, не характерных для БГКП, говорит о том, что кишечной палочки в посевах нет;

-из колоний, характерных для бактерий БГКП (красных с металлическим оттенком), готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. Идентифицируют культуру по оксидазному тесту, положительную реакцию на этот тест дают БГКП, которые не учитываются. Наличие в мазках грамотрицательных бактерий с отрицательной реакцией на оксидазный тест позволяет дать положительный ответ на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды.

Для установления свежего фекального загрязнения делают посев воды в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым. Посевы культивируют при температуре +43_С для дифференциации кишечной палочки от хладнокровных, не растущих при такой высокой температуре. Наличие мути и газа указывает на присутствие в воде бактерий — показателей свежего фекального загрязнения.