2015-06-05
1074
Метод основан на выявлении типичных колоний на дифференциально_диагностическом агаре (ДДА) определенного состава и установления принадлежности бактерий к парагемолитическим вибрионам по морфологическим и биохимическим свойствам. Для исследования на сальмонеллы, листерии и парагемолитический вибрион пробы сырья отбирают с частью кишечника и жабер. Из усредненной пробы отбирают навесок в 25 г. Парагемолитические вибрионы, листерии должны отсутствовать в 25 г морских беспозвоночных, подготовленных к реализации в живом виде.
Для установления наличия парагемолитических вибрионов, пробу в количестве 25 г переносят в 100 мл жидкой среды обогащения. Посевы помещают в термостат при температуре +37_С, через 24 ч проводят пересев на поверхность плотного ДДА. Чашки инкубируют при температуре +37_С в течение 24 ч, выявляют типичные колонии парагемолитических вибрионов.
Для подтверждения принадлежности выделенных на ДДА микроорганизмов к парагемолитическим вибрионам проводят изучение морфологических и ферментативных свойств.
Парагемолитические вибрионы — мезофильные грамотрицательные палочки, прямые или слегка изогнутые, не образующие спор, активно подвижные, содержат цитохромоксидазу, не расщепляют лактозу и сахарозу, растут на питательных средах с содержанием хлорида натрия от 3 до 8%, декарбоксилируют лизин, образуют индол, ферментируют (без газообразования) арабинозу, глюкозу, мальтозу, не образуют ацетилметилкарбинол.
Для идентификации бактерий делают пересев с ДДА в 1%_ную пептонную воду с 3%хлорида натрия, на которой при наличии парагемолитического вибриона появляется помутнение с образованием нежной голубой пленки.
Готовят мазки, окрашивают их по Граму, а также фуксином 1: 5 и изучают морфологию клеток.
Подвижность изучают под фазово-контрастным микроскопом в раздавленной капле или при посеве в полужидкий МПА (0,25%агара), содержащий 3%хлорида натрия. Засевают суточную бульонную культуру в полужидкий МПА и инкубируют при температуре +37_С в течение 24 ч. Подвижные формы образуют диффузное помутнение, слабоподвижные — вырастают по ходу укола.
