Определение коли-титра почвы методом бродильных проб с использованием среды Кесслера

Исследования проводят в три этапа. На первом этапе готовят следующие разведения: для чистых почв—от 1: 10^-1 до 1: 10^-4; для загрязненных — от 1: 10^-3 до 1: 10^-6.После тщательного перемешивания 1 г почвы по 1 мл полученной суспензии из различных разведений переносят в пробиркисо средой Кесслера с поплавками. Посевы культивируют притемпературе +43_С в течение 48 ч (при такой температуре даетрост E. coli только теплокровных).

На втором этапе исследования просматривают посевы на среде Кесслера.

Для установления показателя коли_титра почвы находят пробирку с наибольшим разведением почвы, в результате посева которой появились признаки брожения. Из пробирок с помутнением и газом делают высев на агар Эндо штрихом. Посевы сутки культивируют при 37 С.

На третьем этапе исследуют колонии, выросшие на среде Эндо. Для этого выбирают изолированные колонии, типичные для бактерий БГКП, готовят из них мазки, красят по Граму, микроскопируют. При обнаружении в мазках коротких грамотрицательных палочек проводят высев на среду Кесслера для подтверждения газообразования в чистой культуре.

Особую трудность представляет выделение сибиреязвенных спор из почвы, так как в ней находится огромное количество различных микроорганизмов, в том числе спорообразующих сапрофитных аэробов. Существующие бактериологические методы не всегда позволяют выделить возбудителя сибирской язвы из почвы. Основная трудность состоит в отделении спор от частиц почвы.

Из многих известных методов более надежным является метод предварительной подготовки пробы почвы по следующей технологии:

1) 100 г исследуемой почвы заливают 5–10$кратным объемом стерильного фосфатного буфера или воды;

2) шуттелируют взвесь в течение 20–30 мин, с последующим 5–8 минутным отстаиванием;

3) проводят фильтрование через 2–3 слоя марли;

4) прогревают полученную суспензию в водяной бане в течение 30 мин при температуре +70 С для уничтожения сопутствующей вегетативной микрофлоры;

5) переносят суспензию на поверхность МПА в чашках Петри для получения изолированных колоний, а из них чистой культуры;

6) полученной культурой заражают 5–10 белых мышей подкожно в дозе 0,1–0,2 мл;

7) проводят вскрытие павших мышей и выделяют чистую культуру возбудителя сибирской язвы из органов трупа (см. вклейку, ил. VII).

В настоящее время в бактериологии предложены и применяются менее трудоемкие методы, которые основаны на применении селективных питательных сред. В них вводят 200–500 ЕД/мл полимиксина в сочетании с триметопримом, которые подавляют рост сопутствующей микрофлоры, грамположительных и грамотрицательных бактерий (B. subtilis, B. сereus и E. coli).