Порядок записи спектров флуоресценции

1. Изучить инструкцию по эксплуатации спектрофлуориметра «Универон». Обратить особое внимание на оптическую схему кюветного отделения, подготовку к работе прибора и порядок работы.

2. Ознакомиться со схемой универсальной установки для изучения люминесценции.

3. Включить ПЭВМ. С рабочего стола компьютера загрузить программу Т.МЕТR. Включить спектрофлуориметр, предварительно закрыв обе щели монохроматора перед фотоприемником (ФЭУ).

Внимание! Одновременно с включением прибора в сеть включается источник высоковольтных напряжений и подается напряжение на ФЭУ. Категорически запрещается при включенном приборе открывать кюветную камеру и другие крышки на приборе.

4. В меню программы найти кнопку Интенсиметр и при закрытых щелях монохроматора посмотреть частоту «темновых» импульсов, поступающих от ФЭУ. Информация будет выводиться в отдельном окне на экране дисплея. Убедиться, что число импульсов на ФЭУ не превышает 50 при времени накопления 1 с. Закрыть окно интенсиметра.

5. Измерить спектр люминесценции красителя Родамин-6Ж в растворе этилового спирта для разных частот возбуждения (546,1; 491,6; 435,8 нм). Для этого необходимо:

· Включить ртутную лампу ДРШ-250 (на блоке питания ртутной лампы ЭПС-111 перевести тумблеры «Сеть» и «Лампа ДРШ» в положение «Вкл», нажать кнопку «Пуск»). Дать лампе прогреться 5 — 10 минут и сфокусировать свет лампы на щель монохроматора.

· Выбрать в меню Спектр, соответствующую опцию флуоресценции. В появившемся окне задать параметры: длина волны возбуждения, диапазон регистрации (500 — 700 нм), время регистрации (1 с), шаг сканирования (1 нм).

· Перед началом записи спектра флуоресценции необходимо установить уровень сигнала люминесценции в максимуме спектра люминесценции. Для этого: 1) в окне возбуждения устанавливаем 546,1 нм; 2) диапазон регистрации: начало — 558 нм, конец — 559 нм; 3) шаг сканирования — 1 с; 4) время регистрации — 1 с; 5) нажать клавишу ОК.

· Закрыть окно Спектр и открыть окно Интенсиметр. Плавно открывая щели входного и выходного монохроматоров, установить уровень сигнала света люминесценции порядка 100 000 импульсов на ФЭУ.

· Закрыть окно Интенсиметр и открыть окно Спектр. В параметрах установить диапазон регистрации 500 — 700 нм и нажать кнопку ОК. Прервать регистрацию спектра можно посредством кнопки Стоп.

· Полученный спектр записать на дискету.

Аналогично осуществляются записи спектров при возбуждении на длине волны 491,6 нм (при настройке в максимум полосы люминесценции получить на ФЭУ, открывая щели монохроматоров до 5000 импульсов, записать спектр на дискету) и при возбуждении на длине волны 435,8 нм (в максимуме полосы люминесценции на ФЭУ до 22 000 импульсов, записать спектр на дискету).

· Аккуратно закрыть щели монохроматоров, выйти из программы, выключить (на блоке питания) спектрофлуориметр, выключить лампу.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Воропай Е. С., Дмитриев С. М., Ермалицкий Ф. А., Чернявский А. Ф. Люминесцентный анализ в медико-биологических исследованиях. Рига: РМИ, 1986. С. 35–49.

2. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии. М., 1986.

3. Воропай Е. С., Самцов М. П., Каплевский К. Н., Радько А. Е., Шевченко К.А. // Междунар. конф. по люминесценции: Тез. докл. М., 2001. С. 86–87.

4. Воропай Е. С., Данилевич В. В., Чернявский А. Ф. Методы и аппаратура для спектрально-кинетических исследований высокого временного разрешения // Журнал прикладной спектроскопии. № 58. 1993. С. 13–28.

5. Володько Л. В., Демчук М. И., Зажогин А. П., Севченко А. Н., Чернявский А. Ф. // Журн. прикладной спектроскопии. 1972. Т. 16б. № 6. C. 1001–1007.

6. Воропай Е. С., Самцов М. П. // Тез. докл. Междунар. конф. «Прикладная оптика-94». СПб, 1994. С. 83.

7. Воропай Е. С., Самцов М. П., Каплевский К. Н., Радько А. Е., Шевченко К. А. Импульсный спектрофлуориметр наносекундного диапазона // Вестн. БГУ. Сер. 1: Физ., Мат., Информ. 2002. № 3. С. 7–13.