Фотофлуроуметрический метод анализа

Явление флуоресценции (люминесценция) основана на способности атомов или молекул вещества отдавать поглощенную энергию в виде «холодного» светового излучения, вещество, поглощая свет, излучает световую энергию, энергия квантов света, выделяющаяся при Ф всегда меньше энергии квантов поглощённого света, т.е. если возбуждать Ф УФ лучами, то излучается видимый свет. ƛ излучаемого света больше ƛ возбуждающего.

Правило Спокса: спектр флуористенции смещён в сторону более длинных волн по сравнению со спектром поглощения.

1 – спектр поглощения

2 – спектр флуорисценцции

Отношение числа испускаемых при Ф квантов к числу поглощённых квантов называется квантовым выходом Q. Q не зависит от ƛ возбуждающего Ф света.

ФотоФ. Метод анализа основан на измерении интенсивности Ф, который зависит от концентрации вещества. При флуорисценции вызванной микрокол-ми вещества соблюдается прямая зависимость между интенсивностью свечения и концентрацией раствора. Если концентрация раствора увеличится до 10^-4 г/мл, интенсивность Ф постепенно снижается до 0 (концентрационное тушение Ф). С повышением температуры интенсивность Ф снижается (температурное тушение Ф). интенсивность Ф измеряется на фотофлуориметре.

Схема фотофлуориметра:

Источник у/ф излучения является ртутно-квантовая лампа 1, которая излучает и видимые и тепловые лучи. Для поглощения видимого света предназначены светофильтры 2 и 4. Первичный светофильтр 2 поглощает большую часть видимого света, но пропускает у/ф лучи. УФ лучи, от источника излучения 1 пройдя через светофильтр 2 и попадает в кювету с анализируемым раствором 3. В озбуждаемое в кювете флуорисцентное излучение проходит через вторичный светофильтр 4, задерживающий лучи с ƛ=650 нм и поступает на фотоэлемент 5. Для регистрации фотопотока прибор оснащён усилителем 6 и микроамперметром 7.

В кювету помещают анализируемый раствор, отмечают показания прибора и заполняют кювету стандартным раствором, затем контрольным раствором, не содержащим определяемого вещества. Во все растворы добавляют необходимые реактивы.

Концентрация анализимруемого вещества (С_х мкг/мл):

С_х=(а₁-а₂)/а₃-а₂ мкг/мл

а₁,а₂,а₃ – показания фотофлуориметра при заполненными кюветами анализируемым, контрольным и стандартным раствором соответственно.

С – концентрация стандартного раствора.

Различают 2 группы фотофлуорисцентных определений:

1) По собственной флуорисцениции вещества (определение тиамина, рибофламина).

2) на основе реакций, в результате которых из нефлуорисцентного вещества образуется флуорисцирующий продукт (определение цинка).

Практическое применение: широко применяют люминисцентные индикаторы в титрических методах.

№3 Спектроскопические методы