Московский Государственный Университет им. М. В. Ломоносова
Биологический факультет
Кафедра Биоорганической химии
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ
им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова
Российской академии наук
(ИБХ РАН)
Учебно-Научный Центр
Дипломная работа
Разработка методов выделения рекомбинантного сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF 165.
Development of methods for isolation of the recombinant vascular endothelial growth factor VEGF 165
Выполнил: студент 5 курса Ханнанов Ринат Асхатович
Khannanov Rinat Askhatovich
Научный руководитель: с.н.с. лаб. Биотехнологии к.х.н. Есипов Р.С.
Москва 2012
Оглавление
Список сокращений……………………………………………………..…….3
Введение……………………………………………………………………...…5
Литературный обзор……..…………………………………………….……...7
Общие сведения о Васкулярных эндотелиальных факторах роста.......….…7
История открытия……………………………………………...……………............7
Семейство васкулярных эндотелиальных факторов роста………..........….10
|
|
Сосудистый эндотелиальный фактор роста –А…………………..……...........8
Васкулярный эндотелиальный фактор роста 165 (VEGF165)……..……….10
Биологическая роль VEGF 165……. ……………….…………………..………….11
Применение васкулярного эндотелиального фактора роста VEGF 165 в медицине. …………………………………………………….……..………….……….16
Терапевтический ангиогенез….………………………………………...…………..16
Анти VEGF терапия..………………………………………………………..….......17
Методы получения рекомбинатногоVEGF 165 человеческого…………….21
Получение rhVEGF165 в эукариотической системе экспрессии….…………21
Получение rhVEGF165 в прокариотической системе экспрессии………..…22
Материалы…..……………………………………………………………......25
Методы…….……………………………………………………..…………....28
Результаты и обсуждение…………………………………………………...37
Заключение…………………………………………………………..………..54
Выводы…...…………………………………………………………………....55
Благодарности ……………………………………………………………….56
Список литературы………………………………………………………….57
Список сокращений
VEGF – сосудистый эндотелиальный фактор роста
(Vascular endothelial growth factor)
VEGFR-1 – мембранный рецептор 1 сосудистого эндотелиального
фактора роста (Vascular endothelial growth factor receptor)
VEGFR-2 – мембранный рецептор 2 сосудистого эндотелиального
фактора роста (Vascular endothelial growth factor receptor)
CBD – хитинсвязывающий домен
FGF-1, -2 – фактор роста фибробластов (fibroblast growth factor)
FGFR – рецептор фактора роста фибробластов
PDGF – тромбоцитарный фактор роста (platelet derived growth factor)
|
|
PDGFR – рецептор тробмоцитарного фактора роста
HIF-1 – фактор, индуцируемый при гипоксии (hypoxic inducible factor)
Ang-1,-2 - ангиопоэтины
PAS - семейство доменов (PER-ARNT-SIM)
Per – белок кодируемый геном Drosophila melanogaster, отвечающий за
биоритмы организма (period circadian protein)
Arnt – аryl hidrocarbon receptor nuclear translocator protein
SIM – single minded protein
bHLH - семейство факторов транскрипции («спираль-петля-спираль»)
(basic Helix-Loop-Helix)
pVHL - опухолевый супрессор (von Hippel Lindau)
Tie-2 - мембранный киназный рецептор (Tunica interna endothelial
kinase-2)
MAPK - митоген-активированная киназа (mitogen-activated
protein kinase)
PI3K- фосфатидилинозитол 3-киназа (phosphatidylinositol 3-kinase)
Grb2 - белок сателлит фактора роста (Growth factor receptor-bound
protein 2)
FRS-2 – субстрат рецептора фактора роста фибробластов (Fibroblast growth factor receptor substrate 2)
Ras – сигнальный белок, принадлежащий семейству малых
гуанозинтрифосфатаз
Raf - сигнальный белок, серин/треонин-специфичная протеин-киназа
ERK – внутриклеточная сигнальная киназа (extracellular-regulated kinase)
MEK - митоген-активированная киназа киназа (Mitogen-activated protein
kinase kinase)
Src – семейство протоонкогенных тирозин киназ
C-Kit – поверхностный цитокиновый рецептор
ECM – межклеточный матрикс (extracellular matrix)
ATP - аденозин-5`-трифосфат
БСА – бычий сывороточный альбумин
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИПТГ – изопропилтио-b-D-галактозид
ПААГ – полиакриламидный гель
ПЦР - полимеразная цепная реакция
Трис - трис(гидроксиметил)метиламин
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
DTT – 1,4-дитиотреитол
dNTP – дезоксирибонуклеозид-5`-трифосфаты
SDS - додецилсульфат натрия
TEMED – N,N,N,N-тетраметилэтилендиамин
Amp – ампициллин