2015-09-07
607
Об активности каталазы можно судить либо по количеству перекиси водорода, разложившейся под влиянием этого фермента, либо по количеству выделившегося при этом кислорода. По методу Крайнева активность каталазы выражают в микромолях перекиси водорода, разложенной 1 мл крови в течение минуты. Каталаза крови содержится почти исключительно в эритроцитах. Активность этого фермента снижается при некоторых заболеваниях, например анемии, туберкулезе, раке и др.
Ход работы:
1. Приготовить суспензию эритроцитов: отмерить в пробирку 5 мл 0,85% раствора хлористого натрия и добавляют туда 0,1 мл крови, тщательно перемешивая.
2. Отмерить в две пробирки по 5 мл 10% раствора серной кислоты.
3. Отмерить в два тигля по 2 мл 0,5 М раствора перекиси водорода.
4. Отмерить в два стакана по 6 мл 0,85% раствора хлористого натрия и по 2 мл суспензии эритроцитов.
5. С помощью пинцета поместить на дно каждого стакана тигель с перекисью водорода.
6. В первый стакан (контроль) влить из пробирки 5 мл 10% раствора серной кислоты и перемешать содержимое (инактивация каталазы).
7. Второй стакан с тиглем (опыт) вращают до перемешивания содержимого, каталаза эритроцитов начинает разлагать перекись водорода. Перемешивание продолжают в течение 30 секунд, после чего вливают в него 5 мл 10% раствора серной кислоты из пробирки. Реакция приостанавливается. Избыток перекиси водорода в обоих стаканах (опыт и контроль) титруют 0,1N раствором перманганата калия до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд.
Вычисление производят по формуле:
(А - В) ´ 1,7 ´ 2
0,04 ´ 34
1 мл 0,1N раствора KMnO4 эквивалентен 1,7 мг перекиси водорода
0,04 – количество крови в стакане
А – количество миллилитров 0,1N раствора KMnO4, пошедшего на титрование контрольного стакана,
В – количество миллилитров 0,1N раствора KMnO4, пошедшего на титрование опытного стакана,
В норме активность каталазы равна 12-20 ммоль/мл/мин.
